【摘 要】
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生长激素释放激素(GHRH)是一类蛋白激素,它的主要生物学功能是刺激垂体细胞分泌生长激素,GHRH通过与其受体GHRHR结合,对脊椎动物的生长发育和代谢调控发挥重要的作用。布氏鲳
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生长激素释放激素(GHRH)是一类蛋白激素,它的主要生物学功能是刺激垂体细胞分泌生长激素,GHRH通过与其受体GHRHR结合,对脊椎动物的生长发育和代谢调控发挥重要的作用。布氏鲳鰺是一种快速生长的海洋鱼类,为了揭示其代谢与摄食机制,本论文研究了布氏鲳鰺GHRH和GHRHR基因在不同养殖温度下及餐前餐后的表达模式。利用RACE技术克隆得到布氏鲳鰺GHRH基因的cDNA全长序列为1019 bp,5’UTR、3’-UTR长度分别为327bp和164bp,ORF为528 bp,共编码175个氨基酸。同源性分析结果表明,布氏鲳鰺GHRH基因与同为鲈形目的斜带石斑鱼同源性为97.1%,亲缘关系较近;布氏鲳鰺GHRHR基因cDNA序列全长为 1141bp,其中 5’-UTR、3’-UTR 长度分别为 66 bp 和 469 bp,ORF 为 606bp,编码201个氨基酸。同源性分析表明,布氏鲳鰺GHRHR基因与其它几种鲈形目鱼类的同源性在86%以上,进化树分析显示布氏鲳鰺GHRHR基因与红甘鰺单独聚为一枝,亲缘关系较近。采用实时荧光定量PCR技术研究了布氏鲳鰺GHRH和GHRHR基因的组织表达情况。结果显示,布氏鲳鰺GHRH基因的表达区域大多都集中在中枢系统,其中下丘脑表达量最高,而其他外周组织几乎没检测到表达;布氏鲳鰺GHRHR在脑部区域的端脑、中脑、小脑、下丘脑和垂体中也均检测到广泛分布,且在垂体中的表达量最高。在四个梯度养殖温度(21℃;25℃;29℃;33℃)下,布氏鲳鰺下丘脑GHRH的表达存在差异,在低温组21 ℃时,布氏鲳鰺GHRH mRNA表达量最高(P<0.05),且温度组25℃时布氏鲳鰺GHRH mRNA的表达量也高于温度组29℃和温度组33℃,但没有显著差异(P>0.05);布氏鲳鰺垂体GHRHR mRNA在不同温度梯度的表达量也不一样,其中在温度组29℃时表达量最高(P<0.05),且温度组25℃时布氏鲳鰺GHRHR mRNA的表达量也明显高于低温组21℃和高温组33℃(P<0.05)。在餐前餐后的实验中设置7个处理组,每组10尾布氏鲳鰺幼鱼,体重为68.01±4.34g。饲养一周后取样,将凌晨4:00作为-3时、早上6:00作为-1时、早上7:00作为0时、早上8:00作为+1时和早上10:00作为+3时,其中有两个组在0时禁食,作为对照组。实验结果显示,布氏鲳鰺下丘脑GHRH和垂体GHRHR mRNA的表达量在餐后1h的表达量都明显上升(P<0.05),但在餐后3h后又显著下降(P<0.05)。本研究可得出以下结论:1、首次克隆获得布氏鲳鰺GHRH和GHRHR基因的全长序列;2、布氏鲳鰺GHRH和GHRHR基因的表达区域大多都集中在脑部神经组织;3、不同的温度环境和摄食水平,布氏鲳鰺GHRH和GHRHR基因的表达量存在明显差异,GHRH和GHRHR与温度在一定范围内呈负相关,并且这两个基因在布氏鲳鰺的摄食调控中可能存在潜在作用。本研究结果可进一步为GHRH和GHRHR基因在鱼类的生长代谢和摄食规律提供理论参考。
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