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目的通过1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)诱导人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立血管内皮高通透性模型,观察麝香乌龙丸提取物对HUVECs细胞通透性的调控作用,初步探讨麝香乌龙丸保护血管屏障减轻类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)滑膜炎症的可能机制。方法将HUVECs细胞分为3组,分别为对照组、S1P诱导组和麝香乌龙丸提取物组。1采用Transwell法检测HUVECs细胞通透性变化。2通过划痕实验测定血管内皮细胞迁移的变化。3采用免疫荧光染色法分别观察三组HUVECs细胞中闭锁小带蛋白-1(Zonula occludens-1,ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、闭合蛋白-5(Claudin-5)的变化。4蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测三组HUVECs细胞中ZO-1、Occludin、Claudin-5的表达水平。结果1通透性实验结果显示,S1P诱导组HUVECs细胞通透性较对照组显著增高(P<0.01);麝香乌龙丸提取物组HUVECs细胞通透性较S1P诱导组明显降低(P<0.01)。2划痕实验结果显示,S1P诱导组HUVECs细胞迁移的距离大于对照组(P<0.01);经麝香乌龙丸提取物培养后,与S1P诱导组相比HUVECs细胞迁移距离明显减少(P<0.01)。3 ZO-1蛋白免疫荧光染色结果显示,对照组HUVECs细胞ZO-1蛋白明显主要分布于内皮细胞膜上;S1P诱导组ZO-1蛋白可见荧光染色减弱,蛋白表达明显降低;麝香乌龙丸提取物干预后,ZO-1荧光染色明显增强。Claudin-5蛋白免疫荧光染色结果显示,对照组HUVECs细胞Claudin-5蛋白明显分布于细胞膜上及细胞质内,且细胞膜上呈现较连续的丝状环形;S1P诱导组Claudin-5连接蛋白在细胞膜间连接表达减弱;麝香乌龙丸提取物干预后,Claudin-5表达明显上调。Occludin蛋白免疫荧光染色结果显示,对照组HUVECs细胞Occludin蛋白明显分布于细胞边缘,荧光染色明显;S1P诱导组Occludin在细胞边缘荧光染色明显缺失;麝香乌龙丸提取物干预后,Occludin表达显著上调。4 Western Blot结果显示,与对照组比较,S1P诱导组HUVECs细胞中ZO-1、Occludin、Claudin-5的蛋白表达显著减少(P<0.01);与S1P诱导组比较,麝香乌龙丸提取物组三种蛋白表达均增加(P<0.05)。结论麝香乌龙丸提取物可以通过上调ZO-1、Claudin-5及Occludin连接蛋白的表达,对高浓度S1P诱导的HUVECs细胞通透性增加起到明显抑制作用,从细胞分子水平揭示了麝香乌龙丸抑制RA滑膜炎症的可能作用机制。图6幅;表2个;参165篇。