论文部分内容阅读
目的：观察盐酸埃克替尼对肠癌细胞放射敏感性的影响，并从机制上了解其是否通过改变细胞DNA双链断裂修复、细胞周期分布及凋亡实现放射增敏作用。 方法：选取野生型肠癌HT29和突变型肠癌HCT116两种细胞系为实验对象，通过MTT方法检测盐酸埃克替尼对两种肠癌细胞株的增殖抑制率；以吉非替尼为阳性对照，克隆形成实验分析盐酸埃克替尼对两种肠癌放射增敏作用；运用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期，并用免疫荧光方法及western blot方法检测不同干预组细胞中γ-H2AX、53BP1的表达，最后建立两种人肠癌细胞裸鼠荷瘤模型，随机分为四组：对照组(con)、盐酸埃克替尼组(IH)、放疗组（RT）、联合治疗组（IH+RT），观察盐酸埃克替尼联合放疗在体内水平对肿瘤增殖的影响。 结果：MTT结果显示盐酸埃克替尼对HT29及HCT116细胞均有抑制作用，随药物浓度的增加其抑制作用而增加；克隆形成实验显示盐酸埃克替尼对HT29细胞和HCT116细胞均有增敏作用，且效果优于吉非替尼；流式细胞仪检测不同处理组细胞周期和凋亡结果显示，不论对HT29或HCT116细胞，盐酸埃克替尼增加了放疗后肿瘤细胞凋亡，且较其他组差异显著（P＜0.01）；细胞周期分布分析显示，在HT29细胞中联合组G2/M期相较于其他三组有统计学差异（P＜0.05），而在HCT116细胞中联合组较其他三组延长G2/M期停滞，但与放疗组相比，无统计学差异（P＞0.05）；免疫荧光和Western blot检测结果显示，药物联合放疗组增加了细胞γ-H2AX、53BP1的表达，较其他三组差别明显（P＜0.05）。体内试验显示，盐酸埃克替尼联合放疗组明显延迟肿瘤生长。 结论：1、盐酸埃克替尼在体外及体内水平均有效增加了人大肠癌细胞HT29和HCT116的放射敏感性；2、盐酸埃克替尼通过影响与DSB修复相关重要蛋白—γ-H2AX、53BP1表达，延长G2/M期停滞，加重放疗后肿瘤细胞内的DNA损伤，增加肿瘤凋亡，从而增进放疗疗效；3、本研究显示，在DSB修复路径中的关键蛋白，如53BP1，其功能改变将影响肿瘤对治疗的反应，进一步行相关干预研究可能会发现更多人类肿瘤细胞的放射增敏的策略或生物标记物。