香菇是人们日常生活中常见的食用菌。在我国,香菇的产量位居世界之首,香菇是“菇中之王”,其营养成分具有很多生理功能。其中,香菇多糖作为香菇中的重要药用生理活性物质,尽管其抗癌等生理作用研究甚多,其降脂作用的研究在国外研究却较少,国内这方面的研究基本处于浅层阶段,其缓解高脂血症、降血脂的分子机制尚不清楚。本论文以香菇中的活性成分即香菇多糖为研究对象,从动物模型、生化表型角度评估香菇多糖降脂作用,并在此基础上进一步探究香菇多糖降血脂的分子机制,为含有香菇多糖功能性食品、保健品的开发提供科学的理论基础。香菇多糖对高脂小鼠宏观表型的影响。本课题模拟人类饮食习惯,通过长期饲喂高脂饲料建立ICR高脂血症小鼠模型,将实验小鼠进行不同分组不同处理通过表型特征来评估香菇多糖对高脂血症小鼠的降脂作用。实验结果表明,香菇多糖能缓解高脂饮食过程中小鼠体重的增加；从肝脏大小及颜色等外观表型的角度来看,不同剂量的香菇多糖处理后的小鼠肝脏色泽不断接近正常肝脏,且呈剂量依赖性。与对照组相比,高脂组肝脏明显增大,而保护组尤其是500mg/kg浓度的香菇多糖能缓解其高脂引起的肝脏损伤。此外,与高脂组相比,保护组肝脏指数分别降低了0.3%、0.64%、1.34% (p>0.05,p<0.05,p<0.01)。提示香菇多糖对高脂小鼠具有一定的保护作用。香菇多糖对高脂饮食小鼠生化表型的影响。为了检验香菇多糖对小鼠血脂水平的影响,我们将得到的血清进行生化指标检测。结果表明,香菇多糖能有效降低总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)水平,升高高密度脂蛋白(HDL-c)水平,且其效果呈剂量依赖型。其中,500mg/kg浓度的香菇多糖效果最佳(p<0.01,p<0.01,p<0.01,p<0.01)。香菇多糖对脂代谢相关基因表达的影响。过氧化物酶体增殖物活化受体PPARs家族作为核受体超家族成员之一,有三种亚型,包括PPARα、PPARy和PPARδ。本研究中,我们通过RNA提取后进行Realtime-PCR分析发现高脂饮食能使PPARα、PPARδ表达下调,使PPARy的表达上调；而香菇多糖能升高PPARα、PPARδ的表达,下降PPARy的表达,并影响效果呈剂量依赖性。此外,Western blotting分析也进一步证实了这个结果。固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)中的一种亚型SREBP-1c与脂肪酸代谢和糖代谢相关,是参与脂肪合成基因的主要转录调节因子。本实验结果发现高脂饮食能升高肝脏组织的SREBP-1c的表达,香菇多糖能下调其表达,且效果呈剂量依赖性。Western blotting分析进一步证实了这一结果。CD36是B类清道夫受体(class B scavenger receptor, SREBPs)家族的一员,与脂肪酸转运影响脂肪酸含量变化和胆固醇逆转运过程相关,能影响细胞内脂肪酸含量。与对照组相比,高脂饮食能上调CD36的表达,而香菇多糖能降低其表达上调,且表达效果呈剂量依赖性。这提示香菇多糖是通过SREBP-lc/CD36通路而降脂的。人体糖代谢和脂肪代谢易受体内因高脂饮食而聚集过多的脂肪的影响,而过多的脂肪酸会通过活化细胞核转录因子-κB的路径促进炎症反应,从而形成了一种代谢激活的、慢性的、低度的炎症状态。因此本课题还通过Realtime-PCR分析了肝脏组织炎症因子的表达情况。实验结果表明,通过Realtime-PCR分析,高脂饮食能增加TNF-α、IL-6、iNOS的表达,而香菇多糖处理后尤其是高浓度处理组的小鼠,其肝脏TNF-α、IL-6、iNOS表达量较高脂组均显著下降(p<0.01,p<0.01,p<0.05)。Western blotting分析进一步证实了香菇多糖能抑制TNF-α、IL-6、iNOS的蛋白表达。这些结果提示香菇多糖能抑制高脂动物模型中的肝脏促炎因子的表达。总而言之,本课题通过模拟人类饮食习惯建立高脂血症ICR小鼠模型以评估香菇多糖对高脂小鼠的降脂作用。实验结果发现香菇多糖能缓解高脂小鼠体重增加,降低肝脏指数,保护肝脏；并通过检测生化指标血脂代谢因子,发现香菇多糖能降低TG、TC、LDL-c的水平,升高HDL-c的水平。荧光定量PCR结果显示,香菇多糖是通过促进PPARα、PPARδ的表达,抑制PPARγ、SREBP-1c、CD36的表达来降脂的。然而,香菇多糖能降低炎症因子TNF-α、IL-6、iNOS的过度表达。提示香菇多糖也能抑制高脂饮食引起的长期的低度炎症。