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西兰花是十字花科(Cruciferous)植物的一种,近年来,由于西兰花所具有的保健功能而受到广泛关注,西兰花除了含有丰富的维生素、矿物质、β-胡萝卜素、α-生育酚、硫代葡萄糖酸盐外,其可食部位还含有丰富的酚类物质,如类黄酮、芥子酸衍生物、羟基肉桂酸衍生物和酰化花青素,目前国内外对于西兰花多酚的研究较为有限。本论文中以响应面设计法优化了超声波辅助酶法提取西兰花多酚的提取工艺,研究了大孔树脂分离西兰花多酚的吸附和洗脱工艺,并对分离后的西兰花多酚不同极性组分的抗氧化活性进行了比较,研究结果如下:
(1)超声波辅助酶法提取西兰花多酚最优工艺为:三种酶的配比为果胶酶300U/g,纤维素酶300U/g,木瓜蛋白酶200U/g;液料比7∶1,超声波功率440W,pH值6.2,温度54.8℃,提取时间10min,得到西兰花多酚提取率为1.8765gGAE/kgFW。
(2)通过比较HPD-826,ADS-17,AB-8,DM-130和D101五种大孔树脂对西兰花多酚的静态吸附、解吸性能,发现HPD-826型大孔树脂对西兰花多酚类物质的吸附量大,解吸率高,较适合于西兰花多酚类物质的分离。
(3)通过HPD-826型大孔树脂对西兰花多酚的动态吸附、解吸实验,确定了适宜的工艺条件为:上样液多酚浓度为4.0mg/mL,上样流速为1.5mL/min,当上样体积达到380mL(即2.5BV)时,西兰花多酚开始泄漏;当上样体积达到1200mL(即8BV)时,大孔树脂的吸附量达到饱和。用2BV体积的蒸馏水冲洗饱和吸附的大孔树脂,然后采用80%的乙醇水溶液以2.0mL/min洗脱树脂柱,当洗脱体积达到380mL(大约为2.5BV)时,即可将全部吸附的多酚洗脱下来。经计算,分离后西兰花多酚中总酚含量达到76.32%(没食子酸当量),多酚回收率达到90%以上。
(4)采用溶剂萃取法对经大孔树脂分离后的西兰花多酚纯化物进行分离,按照极性不同分别得到水相、正丁醇相、乙酸乙酯相和石油醚相四个组分,分别以清除DPPH自由基、羟基自由基和还原能力为指标,研究这四个组分的抗氧化活性。实验结果表明:水相萃取物、正丁醇相萃取物、乙酸乙酯相萃取物清除DPPH自由基的IC50分别为:5.3522μg/ml、7.386μg/ml、12.766μg/ml;清除羟基自由基的IC50分别为:23.747μg/ml、42.914μg/ml、296.79μg/ml;水相萃取物、正丁醇相萃取物、乙酸乙酯相萃取物和石油醚相萃取物的还原能力(FRAP值)依次为:1.663mmolFeSO4/g、1.299mmolFeSO4/g、1.046mmolFeSO4/g、0.764mmolFeSO4/g,说明西兰花多酚中极性越高的组分其抗氧化活性越高,即水相>正丁醇相>乙酸乙酯相>石油醚相。