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目的基于TGF-β/Smads信号通路和促炎症因子/NF-κB信号通路解析黄芪总皂苷与甘草酸配伍抗肝纤维化的协同增效作用机制。方法(1)采用0.5%DMN诱导大鼠肝纤维化/肝硬化,共计4周。于造模第三周起分别用黄芪总皂苷(AS)、甘草酸(GA)、黄芪总皂苷联用甘草酸(AS/GA)以及黄芪汤(HQD)药物干预。检测血清肝功能、肝组织羟脯氨酸含量、肝组织病理组织学,免疫组化、免疫荧光共染、qRT-PCR及Western blot检测炎症相关因子(NFκB1、NFκB2、NFκBp65、IL-6、CCL2)、与纤维化相关基因(α-SMA、TGF-β1、Col-I、Col-IV、MMP2、TIMP1、TIMP2)以及骨成形蛋白-激活素膜结合阻断因子(BAMBI)的表达情况。(2)体外实验采用100ng/ml LPS刺激LX-2、h HSCs细胞,给予AS和GA分别单用或联用以及BAY11-117082(NF-κB抑制剂)干预1小时或4小时,提取细胞总RNA和蛋白,qRT-PCR和Western blot检测p65、TNF-α和BAMBI表达;5ng/ml h TGF-β1刺激LX-2、h HSCs细胞,给予AS和GA分别单用或联用以及SB431542(TβRI抑制剂)干预1小时或24小时,提取细胞总RNA和蛋白,qRT-PCR和Western blot检测肝星状细胞细胞活化指标(α-SMA、Col-Ⅰ)和TGF-β信号通路相关蛋白Smad2/3。100ng/ml LPS和5ng/ml h TGF-β1共同刺激LX-2、h HSCs细胞,给予AS和GA分别单用或联用干预1小时或24小时,提取细胞总蛋白检测肝星状细胞活化指标(α-SMA)、TGF-β以及LPS信号通路相关指标Smad2/3、NFκBp65。结果(1)动物实验结果显示,AS、GA、AS/GA和HQD均可改善DMN大鼠的肝脏炎症并抑制肝纤维化的进展。其中,AS/GA组降低血清ALT、AST和肝组织羟脯氨酸含量作用优于AS和GA分别单用组,并与GA组有统计学差异(P<0.05);AS、GA、AS/GA和HQD能不同程度降低促纤维化因子TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅳ、TIMP1/2、MMP2/9 m RNA的表达,并减少炎症因子NFκB1、NFκB2、CCL2、IL6 m RNA的表达,AS/GA组降低TGF-β1、Col-Ⅳ、TIMP1/2、MMP2/9m RNA的作用优于AS组和GA组,并与GA组有统计学差异(P<0.05或P<0.01);AS/GA组显著降低α-SMA m RNA和蛋白表达,与AS组和GA组均有统计学差异(P<0.05);AS/GA组降低炎症因子NFκB2、CCL2、IL6 m RNA和NFκBp65及其磷酸化蛋白表达的作用显著优于两者单用(P<0.05、P<0.01或P<0.001);与正常组比较,M组大鼠BAMBI表达降低,经各药物干预后,BAMBI表达均显著增加(P<0.05、P<0.01或P<0.001),以AS/GA组增加尤为显著(P<0.001)。(2)采用LPS刺激h HSCs,与control组相比,LPS组TNF-αm RNA显著升高而BAMBI m RNA及蛋白水平显著下降(P<0.05),与LPS组相比,AS、GA、AS/GA和BAY11-7082组TNF-αm RNA的水平显著降低(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而BAMBI m RNA及蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01);经LPS刺激的LX-2也显示LPS组BAMBI蛋白表达下降,各药物干预组BAMBI蛋白水平均升高。TGF-β1刺激h HSCs或LX-2,促进Smad2/3磷酸化,而AS、GA分别单用和联用组均可显著减少TGF-β1诱导的Smad2/3磷酸化,且二者联用效果更显著;AS、AS/GA以及SB431542显著降低TGF-β1诱导的α-SMA、Col-Ⅰ表达(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。h HSCs在LPS和TGF-β1共刺激下,NFκBp65和Smad2/3的磷酸化以及α-SMA蛋白表达均显著增加,经AS、GA和AS/GA干预后,有不同程度的降低,AS/GA在抑制LPS和TGF-β1双刺激诱导的肝星状细胞活化方面更具优势。结论黄芪汤及其有效组分AS和GA能够改善肝组织炎症和胶原纤维沉积,通过抑制肝星状细胞TGF-β/Smads信号通路和NF-κB信号通路的活化,上调BAMBI表达,从而改善肝纤维化。AS和GA联用具有协同作用,效果优于两者分别单用。