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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是最受人们广泛关注的革兰氏阴性机会病原菌之一,可对人类、动物等造成相当高的致病率和死亡率。近年来,PA在低营养环境及许多外界条件下的生存能力和耐受性持续性增强,而氨基酸对于PA适应不良环境过程中的应激生存手段与胞内调控机制是至关重要的。本课题组前期筛选铜绿假单胞菌PAO1的生物降解相关基因的转座突变体库时,得到一株在基本培养基上生长缓慢的转座突变体E9,测序结果显示转座子插于基因PA0334的125bp处,且强启动方向与该基因转录方向相反。突变体生长缓慢并非由于PA0334功能缺失,本研究就该表型的关键作用基因及其功能进行探究。首先构建缺失突变体PAO1(ΔPA0334-5)及其互补体,通过检测其生长水平确定了关键作用基因PA0335,随后构建PA0335的缺失突变体及互补体,就PA0335的功能展开研究。通过生长谱法及生长水平测定,发现PA0335的缺失导致细菌成为不完全性组氨酸营养缺陷体,其在无组氨酸的环境下的生长严重受损,说明PA0335参与了胞内组氨酸的合成代谢。而突变体PAO1(ΔPA0335)在3天后的生长恢复表明了细菌内可能存在与PA0335类似功能的基因。同时,PAO1(ΔPA0335)应对环境胁迫时,该菌成为小菌落变种(small-colony variants,SCVs)。基于生物信息学分析,发现PAO1中的基因PA0335属于HAD超家族,通过检测PA0335体外表达蛋白的磷酸活性,确证了PA0335编码碱性磷酸酶(EC 3.1.3.-),能催化底物的磷酸基团发生转移。此外,基于PAO1(ΔPA0335)构建了含16249个克隆的随机转座突变体库,筛得5株在低营养环境下生长速率提高的转座突变体菌株,测序后发现转座子插于PST系统基因或转录调节因子上,表明PA0335介导的营养缺陷与PST系统在磷酸转运方面存在着密切的调控关系。本研究主要基于生物信息学分析和分子生物学方法对基因PA0335的功能进行了研究,该基因的发现及相关功能的研究为PA适应恶劣环境的耐受性和调控机制的探索提供新的思路及线索。