伯氏疏螺旋体重组膜蛋白rBmpA对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞体外作用研究

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研究目的:通过用伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A(rBmpA)刺激体外培养细胞,包括昆明小鼠(KM)腹腔巨噬细胞、脾脏淋巴细胞及小鼠单核巨噬细胞株(RAW264.7),对其进行细胞增殖实验(MTT),并且收集不同rBmpA浓度刺激后细胞培养上清液,检测IL-1p,IL-6及IL-17细胞因子含量,来探讨各种细胞在莱姆关节炎致病机制中的作用。研究方法:1、探索昆明小鼠脾脏淋巴细胞分离技术,优化提取及培养条件,使其顺利获得较多淋巴细胞。2、探索昆明小鼠腹腔巨噬细胞分离技术,优化提取及培养条件,使其获得更多腹腔巨噬细胞。3、探索RAW264.7巨噬细胞株培养条件,培养方法。4、对昆明小鼠脾脏淋巴细胞及RAW264.7巨噬细胞株进行MTT实验。5、ELISA检测各细胞培养上清中炎性细胞因子IL-6、IL-17及IL-1β含量,探讨不同细胞在莱姆关节炎致病机制中作用。研究结果:1、经过探索,成功开展了昆明小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞分离及培养技术。2、成功开展了RAW264.7巨噬细胞株培养技术。3、对昆明小鼠脾脏淋巴细胞进行MTT实验,与正常对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。4、检测昆明小鼠脾脏淋巴细胞培养上清液中炎性细胞因子IL-6和IL-17含量,与正常对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。5、检测昆明小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液中炎性细胞因子IL-lp含量,与正常对照组比较,差别无统计学意义(P>0.05),分析和探讨了相关原因,为后期进一步研究奠定了基础。6、对RAW264.7巨噬细胞株进行细胞增殖实验,与正常对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:1、rBmpA在刺激脾脏淋巴细胞分泌炎性细胞因子IL-6和IL-17中起到关键作用。2、rBmpA可引起脾脏淋巴细胞和RAW264.7巨噬细胞株增殖。3、腹腔巨噬细胞IL-1β不受rBmpA影响。4、rBmpA与莱姆关节炎密切相关。
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