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背景和目的恶性胶质母细胞瘤是最为常见的脑部恶性肿瘤,也是胶质瘤当中恶性程度最高(WHO分级Ⅳ级)的一种。目前,尽管手术切除辅以术后积极的放化疗已经成为恶性胶质母细胞瘤的标准治疗方案,然而患者在确诊之后,平均生存期仍仅有14个月。因此,寻找切之有效的抗恶性胶质瘤的靶向药物是目前恶性胶质瘤研究迫切需要解决的问题。本课题我们研究蛋白激酶B抑制剂哌立福新(perfosine,PRF)对恶性胶质瘤U251、U87MG细胞增殖、Akt/mTOR、AMPK及其生长因子受体(PDGFR、EGFR)信号通路关键蛋白表达水平的影响及可能的机制。方法(1)取对数生长期细胞,以不同浓度的哌立福新作用人恶性胶质瘤细胞后,用MTT法,集落形成实验,台盼蓝染色和流式细胞术检测哌立福新对恶性胶质瘤细胞增殖的作用。(2)Western blot、免疫荧光检测哌立福新作用于恶性胶质瘤细胞后Akt/mTOR、AMPK信号通路中总的和磷酸化的Akt、S6、4EBP1、LKB1、AMPKα、 ACC的改变,同时检测生长因子受体(EGFR、PDGFRα、PDGFRβ)的表达。(3) RT-PCR检测生长因子受体相关基因EGFR、PDGFRα、PDGFRβ的表达。结果(1)哌立福新能有效抑制恶性胶质瘤U87MG、U251细胞的体外增殖并呈浓度、时间依赖性,且在有效浓度范围内对正常小鼠星形胶质细胞无明显的抑制作用。(2)流式细胞检测技术检测结果显示哌立福新能够诱导人恶性胶质瘤细胞周期阻滞在G2/M期,而在较高浓度时,哌立福新可以促进凋亡,且呈浓度依赖性。(3) Western Blot及细胞免疫荧光结果显示,哌立福新抑制恶性胶质瘤细胞中Akt/mTOR信号通路,同时活化AMPK并使生长因子受体EGFR、PDGFRα, PDGFRβ表达下调,而PCR结果则表明哌立福新并不能从基因水平上影响恶性胶质瘤细胞中受体PDGFR的表达。结论哌立福新抑制恶性胶质瘤细胞的增殖、诱导周期阻滞且在较高浓度下促进凋亡。此外,哌立福新通过调节Akt/mTOR、AMPK信号通路,下调生长因子受体的表达起抗肿瘤作用。且在实验剂量范围内其毒性很低或无毒。本研究结果为临床上哌立福新抗恶性胶质瘤的机制提供了新的研究思路,值得进一步研究。