透明质酸体外干预SDF-1信号通路延缓OA软骨组织退变的研究

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【目的】明确基质细胞衍生因子-1(Stromal Cell Derived Factor-1,SDF-1)信号通路在关节软骨退变中的作用,探索透明质酸(HA)体外干预SDF-1信号通路延缓关节软骨组织退变的可行性,进一步探明HA治疗骨关节病患者的药理机制。【方法】1.将确诊为膝关节骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)患者的关节腔内采集关节液(含有SDF-1),离心去除脱落细胞及残留物,并使用滤网过滤后,测定关节液内SDF-1浓度,-80℃深低温冰箱保存备用。2.将确诊为OA的5例患者于全膝置换术中切取表层大小为3×3×1mm的软骨组织块(Mankin评分为0或1)(见附录)作为试验对象;另因创伤性截肢的5例膝关节的正常软骨组织表层中切取大小为3×3×1mm的软骨组织块(Mankin评分为0或1)作对照;又取胎儿膝关节软骨(由水囊引产法引产胎儿身上获得)大小为3×3×1mm的组织块(Mankin评分为0或1)进行对比实验培养。其培养液分别为含有不同浓度OA关节液(含有SDF-1),HA与OA关节液(含有SDF-1)混合的培养液,37℃CO2培养箱培养观察。3.将实验软骨组织块体外培养48及96小时后,分别收集软骨组织标本及条件培养液进行组织学观测(HE以及潘红-O(Safranin-O)染色),用Mankin评分标准进行组织学评分;免疫组化观察;测定培养液内基质金属蛋白酶-3(Matrix metalloproteinases-3,MMP-3),-9,-13的含量,数据输入SPSS12.0软件进行统计学分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义。【结果】1.OA关节液(含有SDF-1)浓度高的组的软骨组织HE及番红0染色结果观察,细胞数量较少及且胞浆染色不均匀;OA关节液(含有SDF-1)浓度低的组软骨组织HE及番红0染色结果观察,细胞数量要较前组量多,胞浆染色较为均匀。OA关节液(含有SDF-1)浓度高的组软骨组织培养液内MMP-3、9、13酶的含量均要高于OA关节液(含有SDF-1)浓度低的组。2.实验组即培养液为含有SDF-1的OA关节液与HA混合组的软骨组织HF及番红0结果观察,与实验对照组即培养液内含有SDF-1的OA关节液组结果观察相比较,实验组要明显优于实验对照组及空白对照组,即OA关节液(含有SDF-1)浓度低的组结果要好于其余两组;空白对照组组织学观察结果要优于实验对照组。免疫组化观察实验组结果Ⅱ型胶原含量要高于实验对照组及空白对照组,空白对照组Ⅱ型胶原含量要高于实验对照组。培养液检测实验组MMP-3、9、13的含量要明显低于实验对照组及空白对照组,空白对照组MMP-3、9、13的含量要低于实验对照组。【结论】1.体外培养关节软骨过程中加入SDF-1可诱导关节软骨的退变。2.透明质酸可干预SDF-1信号通路以延缓膝关节软骨的退变。
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