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目的:探讨肉桂醛(Cinnamicaldehyde,CIN)、盐酸小檗碱(BerberineHydrochloride,BER)单独和联合氟康唑(Fluconazole,FLC)抗白念珠菌作用及其机制。 方法: 1.参照体外药物敏感试验M27-A方案及棋盘格法:①检测不同pH值的培养基及菌悬液浓度对药物MIC80(80％最低抑菌浓度)的影响;②检测肉桂醛、盐酸小檗碱和氟康唑抗白念珠菌的作用,获得各药物单独抗菌时的MIC80;③检测肉桂醛、盐酸小檗碱和氟康唑分别两两联合时,测定单药的MIC联(药物两两联合时,单药的抑菌浓度)及药物联合作用时的部分抑菌浓度(Fractionalinhibitoryconcentration,FIC)及FIC指数(FICindex,FICI)。 2.根据测定药物的MIC80浓度及联合时的MIC联浓度,进行实验分组。 3.药物单独及联合作用白念珠菌后:①通过血清芽管形成实验,观察药物对白念珠菌的芽管形成能力影响;②通过粘附人口腔粘膜上皮细胞实验,观察药物对白念珠菌粘附人口腔粘膜上皮细胞的能力的影响;③通过蛋黄培养基,检测药物对白念珠菌的细胞外磷脂酶活性的影响;④通过逆转录聚合酶链式反应(ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)技术及凝胶分析软件bandscan4.3,检测药物对白念珠菌PLB1基因的mRNA表达水平差异。 结果: 1.药物对白念珠菌的作用为:①在pH分别为:3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和9.0的RPMI1640培养基条件下,CIN对白念珠菌的MIC80值分别为:640、1280、640、320、320、320和160μg/mL;BER对白念珠菌的MIC80值分别为:160、320、160、80、80、80和20μg/mL;FLC对白念珠菌的MIC80值分别为:32、64、64、16、16、16和4μg/mL。当白念珠菌浓度分别为:5.0×102、5.0×103、5.0×104、5.0×105、5.0×106和5.0×107CFU/mL的条件下,CIN对白念珠菌的MIC80值分别为:40、80、80、160、320和320μg/mL;BER对白念珠菌的MIC80值分别为:5、5、10、20、80和80μg/mL;FLC对白念珠菌的MIC80值分别为:2、2、4、4、8和16μg/mL;②肉桂醛、盐酸小檗碱和氟康唑单独对白念珠菌的MIC80分别为:320、80和16μg/mL;③药物分别两两联合时:CIN(MIC联=80μg/mL)与BER(MIC联=20μg/mL)联合时FICI≤0.5,CIN(MIC联=80μg/mL)与FLC(MIC联=4μg/mL)联合时FICI≤0.5,BER(MIC联=20μg/mL)与FLC(MIC联=4μg/mL)联合时FICI≤0.5。 2.将实验分为:对照组(无药物处理)及试验组CIN80μg/mL、BER20μg/mL、FLC4μg/mL、CIN320μg/mL、BER80μg/mL、FLC16μg/mL、CIN80μg/mL与BER20μg/mL、CIN80μg/mL与FLC4μg/mL、BER20μg/mL与FLC4μg/mL。 3.将各组的药物分别与白念珠菌单独或联合作用后:①各实验组的白念珠菌芽管生成率分别为:85.45%、65.77%、49.36%、53.34%、44.29%、51.52%、36.52%、29.28%、17.56%和6.07%,均低于对照组(P<0.05),且药物联合组的白念珠菌芽管生成率低于药物单用组(P<0.05)。②各实验组的白念珠菌对口腔粘膜上皮细胞的粘附率分别为:100%、96.67%、94.00%、93.33%、88.67%、84.75%、72.56%、44.39%、23.33%和11.41%,均低于对照组(P<0.05),且药物联合组的粘附率低于药物单用组(P<0.05)。③通过蛋黄培养基检测处理后的白念珠菌细胞外磷脂酶活力(Pz值)分别为:0.446、0.576、0.529、0.585、0.614、0.602、0.687、0.688、0.706和0.793,均低于对照组(P<0.05),且药物联合组的细胞外磷脂酶活力低于药物单用组(P<0.05)。④各实验组的白念珠菌PLB1基因在mRNA的相对表达量水平分别为:0.950、0.903、0.847、0.849、0.794、0.781、0.708、0.631、0.536和0.364,均低于对照组(P<0.05),且药物联合组的PLB1基因在mRNA的相对表达量水平低于药物单用组(P<0.05)。 结论: 1.肉桂醛、盐酸小檗碱及氟康唑单独作用于白念珠菌时,其MIC80对其生长有明显的抑制作用;药物分别两两联合时,FICI<0.5,单药的最低抑菌浓度MIC80明显降低,且两种药物联合时具有协同作用,能显著抑制白念珠菌的生长。 2.药物联合作用白念珠菌时,比药物单用的抑制作用好,其作用机制表现为:①药物联合应用组,白念珠菌芽管的形成能力及粘附口腔粘膜上皮细胞的能力明显低于药物单独应用时;②药物联合应用组白念珠菌细胞外磷脂酶的活性及PLB1的mRNA相对表达量明显低于药物单独应用组。