【摘 要】
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目的:探讨胰腺部分切除术所致血糖升高对大鼠肠道菌群及GLP-1变化的影响。方法:将雄性SD大鼠40只随机分为四组:A组（正常组,n=10）,B组（假手术组,n=10）只开腹切除脾脏,C组（实验组n=10）开腹切除脾脏及部分胰腺,D组（干预组,n=10）在C组基础上,给予胰岛素干预（甘精胰岛素注射液,0.1U/kg,每日一次）。观察各组大鼠术后体重的变化,分别于术前、术后24h测空腹血糖,4周时各组
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目的:探讨胰腺部分切除术所致血糖升高对大鼠肠道菌群及GLP-1变化的影响。方法:将雄性SD大鼠40只随机分为四组:A组（正常组,n=10）,B组（假手术组,n=10）只开腹切除脾脏,C组（实验组n=10）开腹切除脾脏及部分胰腺,D组（干预组,n=10）在C组基础上,给予胰岛素干预（甘精胰岛素注射液,0.1U/kg,每日一次）。观察各组大鼠术后体重的变化,分别于术前、术后24h测空腹血糖,4周时各组大鼠行糖耐量试验（OGTT）,同时4周时利用ELISA双抗体夹心法行大鼠胰岛素（D组除外）、C肽释放试验,4周末处死大鼠,留取回肠组织,病理学观察肠道组织形态变化及行免疫组化测定各组NFk B-p65及GLP-1表达变化;留取粪便使用测序平台Illumina Mi Seq PE300对肠道菌群的16S r RNA V3-V4可变区进行测序,并分析比较四组大鼠肠道微生物群的变化。结果:1.各组大鼠术前空腹血糖无明显差异（p>0.05）;术后24h测空腹血糖示:A、B组术后24h空腹血糖值无明显差别（p>0.05）,C组与B组比较空腹血糖值明显升高（P<0.05）,D组与C组比较术后24h空腹血糖值无明显差异（P>0.05）;实验4周行OGTT试验结果示:B组与A组大鼠OGTT试验结果无明显差别（P>0.05）,C组与B组比较,0.5h、1h、2h血糖值均升高,且差异均具有统计学意义（P<0.05）,D组与C组比较0.5h、1h、2h血糖值均下降,其中0.5h血糖值下降明显（P<0.05）;同时实验4周时,行胰岛素释放试验示:A组、B组比较无明显差异（P>0.05）,C组与B组比较0.5h、1h血清中胰岛素浓度降低（P<0.05）。C肽释放实验结果示:A组与B组之间比较C肽释放无明显差别（P>0.05）;C组与B组比较,0.5h、1h C肽浓度均减少（P<0.05）;D组与C组比较4个时间点均无明显差别（P>0.05）;综上可认为胰腺部分切除术可成功复制较为稳定的高血糖模型。2.肠道病理:B组与A组比较无明显差别,绒毛排列致密而整齐,其内的炎性细胞,杯状细胞以及空泡较少;C组与B组比较,肠道绒毛有断裂、排列紊乱、间隙变宽、隐窝结构发生改变,可见杯状细胞及空泡状结构增多,粘膜下层炎性细胞浸润较明显,少量炎性细胞浸润达肌层;D组与C组比较绒毛排列较整齐,粘膜下层炎性细胞浸润减少。肠道组织行NF-k B p65抗体的免疫组化结果显示:B组与A组比较无明显差别,C组与B组比较,肠道粘膜层、粘膜下层、肌层均可见大量棕色深染,与B组比较阳性面积更大,且部分呈强阳性。定量分析结果示:A、B组无明显差异（P>0.05）;C组NF-k B p65的表达量与B组比较明显增加（P<0.05）;D组与C组比较,NF-k B p65表达量无明显降低（P>0.05）。回肠组织行GLP-1免疫组化示:A、B组无明显差异（P>0.05）,C组GLP-1的表达较B组增加,且具有统计学意义（P<0.05）,给予胰岛素干预后,GLP-1表达量较C组变化不明显（P>0.05）。3.对四组大鼠的肠道微生物群测序发现各组肠道菌群在门水平的相对分布情况存在明显差异,B组与A组比较无明显差别,C组与B组比较厚壁菌门丰度明显降低,而拟杆菌数目和变形杆菌的数量呈显著增加,D组与C组比较疣微菌门呈显著增加。从多样性角度出发进行比较:从OTUs、Chao、以及Ace可以看出A组物种总数最少（P<0.05）其余三组无明显差别;Shannon、Simpson指数显示A组、B组群落多样性无明显差别,C组与B组比较微生物多样性明显增高（P<0.05）,D组与C组比较,微生物群落多样性呈现下降（P<0.05）;从Shannoneven可以推断出,A组、B组个体数目在群落中分配的均匀程度无明显差别,C组与B组比较具有明显差异（P<0.05）,D组经胰岛素干预后,与C组比较具有明显差异（P<0.05）。结论:胰腺部分切除术后的高血糖模型大鼠出现了肠道菌群紊乱,表现为厚壁菌门数量明显降低,而拟杆菌门和变形杆菌门的数量呈显著增高,其中NF-k B信号通路的激活可能在其中起一定作用;其次胰腺部分切除术后血糖升高导致回肠L细胞分泌GLP-1增多,进一步代偿,维持血糖稳态。
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