研究背景胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,其中又以高级别胶质瘤最为常见,约占胶质瘤的70%以上,由于具有高侵袭性、高浸润性的特点,常规手术治疗辅以放化疗治疗后肿瘤常有残余,患者术后易复发并且向恶性程度更高级别胶质瘤发展,尽管过去十年不断有新的治疗策略被提出并且在临床前阶段取得实质性进展,但是在临床试验阶段的结果却令人不甚满意,复杂的肿瘤微环境、血脑屏障对药物输送的阻滞、肿瘤内的异质性、有效的肿瘤生物标记物的缺乏等多种因素为胶质瘤的早期发现与治疗带来困难。TEAD蛋白家族属于转录因子,其包括TEAD1、TEAD2、TEAD3、TEAD4四个家族成员。TEAD转录因子参与了多种肿瘤的进展,但目前TEAD3在胶质瘤上的作用鲜有报道。研究目的检测TEAD3转录因子在胶质瘤上表达情况及TEAD3对胶质瘤增殖、侵袭迁移及血管形成的影响。研究方法1.联合TCGA、GTEX、GEO数据库检测TEAD3在胶质瘤及正常组织表达,并进行qPCR验证。2.联合CGGA、TCGA数据库对TEAD3高低表达组胶质瘤进行生存分析,并使用G0、KEGG、GSEA富集分析对TEAD3在胶质瘤上功能进行初步探索。3.使用过表达慢病毒与siRNA上调或敲减胶质瘤细胞TEAD3的表达,通过transwell侵袭、迁移实验、CCK8、平板克隆形成实验、小管形成实验在体外检测TEAD3对胶质瘤的侵袭迁移、增殖、血管形成的影响,通过皮下荷瘤模型在体内检测TEAD3对胶质瘤形成的影响。4.通过qPCR检测hippo通路靶基因CTGF、CYR61表达的情况,使用Westernblot、细胞免疫荧光检测侵袭迁移相关蛋白E-cadherin、MMP9的表达情况。结果1.与正常组织相比TEAD3在胶质瘤上表达升高并且TEAD3高表达与胶质瘤不良预后相关。2.富集分析结果显示细胞外基质重构相关基因集与血管形成基因集合显著富集在TEAD3高表达胶质瘤组中。3.Transwell侵袭、迁移实验结果显示敲减TEAD3抑制胶质瘤细胞迁移与侵袭能力,而过表达TEAD3后细胞迁移与侵袭能力增加。western blot与细胞免疫荧光结果显示TEAD3敲减后细胞E-cadherin蛋白表达及荧光强度升高,MMP9蛋白表达及荧光强度下降,过表达TEAD3后细胞E-cadherin蛋白表达及荧光强度下降,MMP9蛋白表达及荧光强度升高。4.体外小管形成实验结果显示与TEAD3过表达组胶质瘤细胞共培养后脐静脉内皮细胞小管样结构数目增多。CCK8细胞增殖与平板克隆实验结果显示改变TEAD3表达对胶质瘤细胞增殖无影响。过表达TEAD3后hippo信号通路靶基因CTGF与CYR61无明显改变。皮下荷瘤实验结果显示TEAD3过表达组小鼠皮下瘤体积大于对照组小鼠。结论1.TEAD3在胶质瘤上表达升高,是胶质瘤的不良预后因素。2.TEAD3能通过影响E-cadherin与MMP9表达促进胶质瘤侵袭、迁移。3.TEAD3在体外能促进胶质瘤血管形成。4.TEAD3在体外不影响肿瘤细胞增殖,可能与其他TEAD家族成员存在功能冗余相关。5.TEAD3在体内能促进胶质瘤的形成。