【摘 要】
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该研究应用基因工程技术,在体外成功地构建了可溶性MHC四聚体,应用此四价的重组分子,定量检测了特异性T细胞.同时对重组牛痘病毒介导的微小基因的抗原呈递效率,CTL诱导及β2m
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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该研究应用基因工程技术,在体外成功地构建了可溶性MHC四聚体,应用此四价的重组分子,定量检测了特异性T细胞.同时对重组牛痘病毒介导的微小基因的抗原呈递效率,CTL诱导及β2m的辅助作用进行了初步研究.共分四部分,主要内容和结果如下:一、可溶性H-2KOVA四聚体的构建策略研究;在成功地扩增了H-2K基因后,将可生物素化的序列连接到其胞外区末端,构建成可溶性重组分子,进行原核表达.二、重组牛痘病毒介导的微小基因在真核细胞中抗原呈递效率的研究;应用重组牛痘病毒介导的经不同修饰的微小基因及全长基因感染稳定表达K分子的多种真核细胞.并检测细胞表面复合物的形成情况.结果表明,微小基因重组牛痘病毒感染细胞后,细胞表面特异性抗原肽-MHC复合物的密度明显高于全长基因介导的病毒感染,且在人源与鼠源细胞中,它们的表达趋势一致.三、OVA-linker-β2m融合蛋白在特异性CTL诱导中的作用研究;该研究通过linker序列使β2m与肽段共价结合,限制其在体内的扩散,以期获得更具潜力的免疫原结构.通过原核表达OVA-linker-β2m融合基因,经纯化、复性后获得融合蛋白.人源及鼠源细胞经融合蛋白刺激后,细胞表面均有较高的H-2K-OVA复合物表达,说明通过linker连接的肽序列及β2m基因均得到了正确的表达,且OVA-linker-β2m融合蛋白通过外源途径可在细胞表面形成构象完整的复合物.四、sOVA-linker-β2m融合蛋白创建表位特异的靶结构;在前一部分的研究的基础之上,构建了真核表达载体pCDNA3/sOVA-linker-β2m,探讨通过内源性途径递呈的肽在细胞表面形成MHC-I类分子复合物的情况,同时构建了不含有β2m基因的对照载体,以研究β2m是否能在此过程中起到辅助的作用.
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