论文部分内容阅读
本文从以下几个方面进行论述： 第一部分 大鼠脊髓损伤后神经病理性疼痛和痉挛模型建立 目的：制作大鼠脊髓撞击模型，使大鼠脊髓损伤后能稳定出现神经病理性疼痛和痉挛症状。 方法：将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、12.5mm撞击组、25.0mm撞击组，制作T10脊髓撞击模型。每组大鼠在损伤前、损伤后第一天，损伤后每周进行运动功能评分。损伤前，损伤后每周进行机械触超敏和热痛过敏检测。损伤后第一周、损伤后第五周肌电图检测Hmax/Mmax比值、H反射的频率依赖性抑制作用（rate dependent depression，RDD）。脊髓损伤后第五周动物取材，进行损伤节段苏木精-伊红（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，观察脊髓损伤后病理改变，western blot检测脊髓腰骶膨大处Iba-1（ionized calcium binding adapter molecule1，Iba-1）和GFAP（glial fibrillary acidic protein，GFAP）蛋白表达。 结果：（1）脊髓损伤后，25.0mm组BBB得分显著低于12.5mm组BBB得分（损伤后第一天p=0.023，损伤后第一周至损伤后第五周p＜0.001）。（2）脊髓损伤后第二周至第五周，与假手术组相比，12.5mm组机械缩足阈值显著降低(损伤后各时间点p依次为：左足p=0.004，p=0.001，p=0.003，p=0.012；右足p=0.006，p=0.001，p=0.008，p=0.018),25.0mm组机械缩足阈值显著降低（左右后足各时间点均为p＜0.001）。与12.5mm组相比，25.0mm组机械缩足阈值显著降低(左后足各时间点均为p＜0.001；右后足在损伤第二周p=0.002，其余时间点p＜0.001)。（3）与假手术组相比，12.5mm组在损伤后第四周（左后足p=0.001，右后足p=0.006）和损伤后第五周（左后足p=0.006，右后足p=0.008）热痛缩足潜伏时显著缩短。（4）脊髓损伤后第一周，与假手术组相比，25.0mm组Hmax/Mmax比值增大（p=0.012），2Hz（p=0.049）和5Hz（p=0.033）时RDD作用减弱；12.5mm组Hmax/Mmax比值、RDD无显著性差异（p＞0.05）。脊髓损伤后第五周，与假手术组相比，12.5mm组（p=0.001）、25.0mm组（p＜0.001）Hmax/Mmax比值显著增大，2Hz（p=0.040）、5Hz（p=0.048）时12.5mm组RDD作用减弱，在0.5Hz（p=0.027）、1Hz（p=0.014）、2Hz（p=0.014）时25.0mm组RDD作用减弱。（5）HE染色显示，脊髓损伤大鼠脊髓组织排列紊乱，空洞形成。（6）Western blot结果显示，与假手术组相比，12.5mm组（p＜0.001）和25.0mm（p＜0.001）组Iba-1蛋白表达显著增高，25.0mm组与12.5mm组比，Iba-1蛋白表达显著增高（p＜0.001）。与假手术组相比，12.5mm组（p=0.001）和25.0mm组（p＜0.001）GFAP蛋白表达增高。 结论：利用重力打击器能成功制作出不同损伤程度的脊髓损伤模型。大鼠脊髓损伤后后肢能产生神经病理性疼痛和痉挛症状。25.0mm组机械超敏症状比12.5mm严重。25.0mm组比12.5mm组更早出现痉挛症状。大鼠脊髓损伤后Iba-1和GFAP蛋白含量升高。 第二部分 人胚胎干细胞来源的脊髓GABAergic神经前体细胞移植治疗脊髓损伤大鼠神经病理性疼痛和痉挛的疗效研究 目的：人胚胎干细胞来源的脊髓GABAergic神经前体细胞移植治疗脊髓损伤大鼠神经病理性疼痛和痉挛的疗效观察。 方法：将健康成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(S)、脊髓损伤组(SCI)、细胞移植组(SCI+cell)。10g打击棒从25.0mm高度撞击脊髓T10，造成脊髓损伤。脊髓损伤术后1周，移植人胚胎干细胞来源的脊髓GABAergic神经前体细胞到大鼠脊髓。细胞移植一个月后评估各组大鼠的机械超敏症状，检测H反射的Hmax/Mmax，及H反射的频率依赖性抑制作用RDD。细胞移植一个半月注射细胞激活剂氯氮平甲氧氮芥CNO（clozapine-N-oxide，CNO），观察给药前后大鼠的机械超敏症状、H反射的Hmax/Mmax，及H反射的频率依赖性抑制作用RDD。行为学评估后动物取材，免疫荧光染色检测移植细胞在大鼠脊髓存活情况。 结果：（1）细胞移植一个月，人胚胎干细胞来源的脊髓GABAergic神经前体细胞在大鼠体内存活。（2）与假手术组相比，细胞移植组的机械缩足阈值显著降低（左足p=0.001，右足p=0.003）；与脊髓损伤组比，细胞移植组的机械缩足阈值无统计学差异（p＞0.05）。（3）与假手术组相比，细胞移植组的Hmax/Mmax比值显著增大（p=0.008），0.5Hz（p=0.004）、1Hz（p=0.013）、2Hz（p=0.010）时频率依赖性抑制作用显著减弱；与脊髓损伤组相比，细胞移植组的Hmax/Mmax比值无统计学差异（p＞0.05），各频率的频率依赖性抑制作用也无统计学差异（p＞0.05）。（4）注射CNO前后，假手术组机械缩足阈值无统计学差异（p＞0.05），脊髓损伤组机械缩足阈值无统计学差异（p＞0.05），细胞移植组机械缩足阈值无统计学差异（p＞0.05）。（5）注射CNO前后，假手术组Hmax/Mmax比值及RDD作用无统计学差异（p＞0.05），脊髓损伤组Hmax/Mmax比值及RDD作用无统计学差异（p＞0.05），细胞移植组Hmax/Mmax比值及RDD作用无统计学差异（p＞0.05）。 结论：人胚胎干细胞来源的脊髓GABAergic神经前体细胞能在大鼠体内存活，但移植一个月时尚未改善脊髓损伤大鼠神经病理性疼痛和痉挛。利用工具药CNO发现移植细胞有改善脊髓损伤神经病理性疼痛和痉挛的趋势。