论文部分内容阅读
植物在生长、发育、生殖的各个阶段都会受到各种理化、生化因素的影响。特别是植物体内外的各种化学诱导剂,它们都直接或间接地影响着植物体内某些功能基因的表达,从而影响植物的各个生理状态。
在植物基因功能的研究和利用过程中,转基因表达调控技术的发展与应用主要有三个方面,即组成型启动子、组织特异型启动子和诱导型启动子在基因表达调控系统中的运用。为了更好地了解植物生长、发育、繁殖等生理状态的基因表达调控机制,灵活调控植物基因的表达,构建理想的可调控方的化学诱导表达系统在基础研究及生物技术应用等方面具有重要价值。
本研究利用常用的化学诱导剂喷雾处理水稻,通过基因芯片和实时荧光定量PCR分析找到了受诱导剂诱导表达的相关基因,并构建了相关的启动子分析载体对该启动子的诱导特性进行分析。本论文获得的主要结果如下:
(1)用6种诱导剂处理水稻品种黄华占,取幼穗提取RNA用于水稻全基因组表达芯片杂交,获得表达谱数据。
(2)通过比较分析,鉴定出1个上调表达的基因(编号为Os11039)。该基因在非诱导时的表达水平低,约为Actin1的1%,受2种诱导剂BH和QJ诱导后的表达水平提高可达Actin1的20~80%左右。
(3)检测发现Os11039也受34℃以上高温诱导上调表达(4)从黄华占基因组中克隆了Os11039的2870bp启动子序列,命名为P11039。分析发现了该启动子存在的4个可能的热激元件,并用突变方法破坏了这些热激元件,产生了突变型的该启动子P11039m。
(5)为检测该启动子的表达特性,构建了转基因载体pP11039::GUS,pP11039::GFP,pP11039m::GUS和pP11039m::GFP。用这些载体转化水稻获得到了T0转化植株。
(6)初步检测显示GUS报告基因受诱导表达。