【摘 要】
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乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的一种世界性疾病,据统计全球HBV慢性携带者的总数超过2.8亿。中国是乙型肝炎的高流行区,有20%的人感染过。预防乙肝最有效
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乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的一种世界性疾病,据统计全球HBV慢性携带者的总数超过2.8亿。中国是乙型肝炎的高流行区,有20%的人感染过。预防乙肝最有效的途径是接种疫苗,然而目前使用的疫苗具有种种限制性因素,而利用转基因植物生产疫苗有望克服传统疫苗所具有的种种缺点。 本试验利用从乙肝患者血清中提取的乙肝病毒基因组DNA为模板,依据Genbank登录号为AY040804的序列设计含有Kozak序列的引物,扩增出乙肝表面抗原s蛋白基因(HBsAg),经BLAST比对,确认其中有1个碱基发生突变,经分析很可能为一种新的乙肝病毒毒株,现已提交GenBank进行处理。 利用克隆得到的HBsAg基因与二元植物载体pBI121成功地构建出含有CaMV35s启动子、nos中止子、Kan植物筛选标记及HBsAg基因的植物表达载体pBI121-HBsAg。 并通过冻融法将此质粒转化入土壤农杆LBA4404,侵染烟草叶片,目前长势良好,正处在筛选当中。 通过以上实验,将建立起适用于本实验室的烟草、番茄高效遗传转化体系;并利用CaMV35s高效启动子启动HBsAg基因在烟草中表达,获得具有免疫活性物质的再生植株,为利用转基因植物生产食用疫苗提供一定的试验基础。
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