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目的乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染后会导致严重肝脏疾病,如肝硬化、肝癌等。目前临床对于HBV慢性感染者治愈率仍然很低,其中HBV对宿主的免疫监视逃逸起到关键作用。自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)属于固有免疫抵抗病毒入侵的关键细胞之一。有研究发现NK细胞免疫状态可能影响到HBV清除,但是具体机制未明确。抑制性受体程序化坏死因子-1(Programmed death protein 1,PD-1)和抑制性受体程序化坏死因子-配体1(Programmed death ligand 1,PD-L1)为抑制性受体及其配体,其过度表达可能抑制NK细胞的杀伤功能。本研究目的是分析在慢性HBV感染患者中NK细胞上PD-1/PD-L1表达与HBV感染后其复制及与宿主肝功能状态的相互关系。方法通过招募并筛选了31个健康对照人群和26个HBV感染患者作为研究对象,收集所有研究对象EDTA抗凝血2.0ml和非抗凝血3.0ml,非抗凝血离心后收集血清备用。1、使用流式细胞术检测两组人群全血CD3~-CD56~+NK细胞频数和CD3~-CD56~+CD16~+NK细胞频数及这些细胞上PD-1和配体PD-L1的表达情况;2、使用紫外-乳酸脱氢酶法检测两组人群血清丙氨酸氨基转移酶(Serum alanine aminotransferase,ALT)、使用紫外-苹果酸脱氢酶法检测两组人群血清天门冬氨酸氨基转移酶(Serum aspartate aminotransferase,AST)、使用直接化学发光法检测两组人群血清甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP);3、使用时间分辨免疫荧光分析法(Time-resolved Immunofluorometric Assay,TRFIA)检测两组人群血清中乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(Hepatitis B virus surface antibody,HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(Hepatitis B virus e antigen,HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(Hepatitis B virus e antibody,HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(Hepatitis B core antibody,HBcAb);4、使用ADVIA 2120i全自动血液分析仪检测两组人群血常规;5、使用(Fluorescence quantitative polymerase chain reaction,QF-PCR)定量检测两组人群HBV DNA载量。结果1.与健康对照组相比,HBV感染组ALT、AST、AFP明显升高,具有统计学差异(均为P<0.001,P<0.001和P<0.001),提示HBV感染后可能会导致宿主肝功能受损。2.与健康对照组相比,HBV感染组外周血中CD56~+NK细胞频数明显降低(P=0.004);CD56~+NK细胞上表达的PD-1明显升高(P=0.002),具有统计学差异。提示HBV感染后不但会显著抑制CD56~+NK细胞频数,而且可能通过上调PD-1的表达抑制其功能,阻碍NK细胞对HBV的抗病毒作用。3.与健康对照组相比,HBV感染组中CD56~+CD16~+NK细胞频数比健康组细胞频数有明显降低(P=0.001),有统计学意义。再次验证HBV感染会抑制NK细胞的水平。4.通过对HBV感染组中CD56~+NK细胞及抑制性受体/配体PD-1/PD-L1与相关临床检测指标的相互关系分析发现,CD56~+NK细胞频数与HbsAg、HBV-DNA、外周血单核细胞计数均呈负相关(分别为R=-0.475,P=0.014;R=-0.463,P=0.046和R=-0.449,P=0.021)。而CD56~+NK细胞上PD-1表达及PD-1/PD-L1比值与ALT,AST均呈正相关(分别为R=0.408,P=0.043;R=0.415,P=0.039和R=0.417,P=0.038;R=0.414,P=0.039),具有统计学差异。提示HBV感染后可能会通过PD-1的表达上调抑制CD56~+NK细胞频数从而影响到其肝脏功能状态。5.通过对HBV感染组中CD56~+CD16~+NK细胞及抑制性受体/配体PD-1/PD-L1与相关临床检测指标的相互关系分析发现,CD56~+CD16~+NK细胞频数与HbsAg、HBV-DNA均呈负相关(分别为R=-0.533,P=0.005和R=-0.569,P=0.011),而与白细胞、中性粒细胞均呈正相关(分别为R=0.459,P=0.018;R=0.454,P=0.02)。同样CD56~+CD16~+NK细胞上PD-1表达与ALT,AST均呈正相关(分别为R=0.437,P=0.029;R=0.429,P=0.032),均有统计学差异。提示HBV感染会引起CD56~+CD16~+NK细胞上PD-1的表达上调,而PD-1的高表达会抑制CD56~+CD16~+NK细胞频数,影响其抗病毒功能从而影响到肝脏功能状态。结论HBV感染后可使机体NK细胞上PD-1/PD-L1过表达从而影响NK细胞频数,导致HBV逃避宿主免疫监视加快自身复制从而影响宿主肝脏功能状态。