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目的:探讨益母草碱(Leonurine,Leo)抗压力超负荷大鼠心肌肥大的作用及机制。
方法:采用腹主动脉缩窄(abdominal aortic constriction,AAC)的方法建立压力超负荷大鼠心肌肥大模型。经益母草碱高、低剂量组(30mg·kg-1、15mg·kg-1)及阳性对照药氯沙坦钾片组(Losartan,5mg·kg-1)干预27d后,检测血流动力学指标:左室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax);检测左心室肥厚指标:心重指数(HWI)、左心室重量指数(LVWI);微板法和ELISA法分别测定左心室心肌组织中Ca和AngⅡ、AT1R的含量;苏木精-伊红染色(HE)观察大鼠左心室心肌组织病理学的变化和在光镜下测量心肌细胞直径(MD)的大小:蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)方法检测大鼠左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、磷脂酶C(PLC)、三磷酸肌醇(IP3)蛋白的表达量:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测大鼠左室心肌组织中心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)以及原癌基因c-fos、c-myc mRNA的表达量。
结果:(1)与假手术组相比较,HE染色结果显示模型组大鼠左室心肌组织出现明显心肌细胞肥大的改变:左室肥厚指标:HWI、LVWI、MD明显升高:血流动力学指标:LVSP、LVEDP明显上升,同时(±)dp/dtmax明显降低(P<0.01);左室心肌组织中AngⅡ、AT1R和Ca含量明显升高(P<0.01);左室心肌组织中心房利钠因子(ANF)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)以及原癌基因c-fos、c-myc mRNA的表达量显著上调(P<0.01),同时左室心肌组织中磷脂酶C(PLC)、三磷酸肌醇(IP3)、AngⅡ、AT1R蛋白水平也出现明显升高(P<0.01)。(2)与模型组比较,益母草碱各剂量组大鼠左室心肌HE染色结果显示,益母草碱能改善心肌组织病理形态,减少心肌细胞的肥大、水肿及炎症细胞的浸润;同时,益母草碱各剂量组能有效降低大鼠LVSP、LVEDP、HWI、LVWI、MD的值,升高左心室(±)dp/dtmax值(P<0.05);此外,益母草碱各剂量组可以下调ANF、β-MHC、AngⅡ、AT1R、c-fos、c-myc mRNA表达量和AngⅡ、AT1R、PLC、IP3蛋白的表达量(P<0.05)。
结论:(1)本实验成功复制腹主动脉缩窄术致压力超负荷大鼠心肌肥大模型;(2)益母草碱能抑制腹主动脉缩窄术后大鼠左心室肥厚的发生;(3)益母草碱抗压力超负荷大鼠心肌肥大的作用机制可能与抑制RAS的激活,从而下调ANT、β-MHC、AngⅡ、AT1R、c-fos、c-myc mRNA表达和AngⅡ、AT1R、PLC、IP3蛋白的表达有关。
方法:采用腹主动脉缩窄(abdominal aortic constriction,AAC)的方法建立压力超负荷大鼠心肌肥大模型。经益母草碱高、低剂量组(30mg·kg-1、15mg·kg-1)及阳性对照药氯沙坦钾片组(Losartan,5mg·kg-1)干预27d后,检测血流动力学指标:左室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax);检测左心室肥厚指标:心重指数(HWI)、左心室重量指数(LVWI);微板法和ELISA法分别测定左心室心肌组织中Ca和AngⅡ、AT1R的含量;苏木精-伊红染色(HE)观察大鼠左心室心肌组织病理学的变化和在光镜下测量心肌细胞直径(MD)的大小:蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)方法检测大鼠左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、磷脂酶C(PLC)、三磷酸肌醇(IP3)蛋白的表达量:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测大鼠左室心肌组织中心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)以及原癌基因c-fos、c-myc mRNA的表达量。
结果:(1)与假手术组相比较,HE染色结果显示模型组大鼠左室心肌组织出现明显心肌细胞肥大的改变:左室肥厚指标:HWI、LVWI、MD明显升高:血流动力学指标:LVSP、LVEDP明显上升,同时(±)dp/dtmax明显降低(P<0.01);左室心肌组织中AngⅡ、AT1R和Ca含量明显升高(P<0.01);左室心肌组织中心房利钠因子(ANF)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)以及原癌基因c-fos、c-myc mRNA的表达量显著上调(P<0.01),同时左室心肌组织中磷脂酶C(PLC)、三磷酸肌醇(IP3)、AngⅡ、AT1R蛋白水平也出现明显升高(P<0.01)。(2)与模型组比较,益母草碱各剂量组大鼠左室心肌HE染色结果显示,益母草碱能改善心肌组织病理形态,减少心肌细胞的肥大、水肿及炎症细胞的浸润;同时,益母草碱各剂量组能有效降低大鼠LVSP、LVEDP、HWI、LVWI、MD的值,升高左心室(±)dp/dtmax值(P<0.05);此外,益母草碱各剂量组可以下调ANF、β-MHC、AngⅡ、AT1R、c-fos、c-myc mRNA表达量和AngⅡ、AT1R、PLC、IP3蛋白的表达量(P<0.05)。
结论:(1)本实验成功复制腹主动脉缩窄术致压力超负荷大鼠心肌肥大模型;(2)益母草碱能抑制腹主动脉缩窄术后大鼠左心室肥厚的发生;(3)益母草碱抗压力超负荷大鼠心肌肥大的作用机制可能与抑制RAS的激活,从而下调ANT、β-MHC、AngⅡ、AT1R、c-fos、c-myc mRNA表达和AngⅡ、AT1R、PLC、IP3蛋白的表达有关。