鼠李糖苷酶TpeRha能特异性作用于淫羊藿黄酮母核C-3位置的α-1鼠李糖苷键,是酶法制备具有显著抗癌活性成分淫羊藿苷元的优良的关键酶。为进一步提高该酶的温度稳定性及降低酶的使用成本,论文主要研究了TpeRha的固定化技术,分别建立了无载体固定TpeRha和以环氧树脂为载体固定TpeRha的方法。同时,建立了以固定化酶TpeRha和游离酶Tpebgl3（β-葡萄糖苷酶）联用转化淫羊藿总黄酮制备淫羊藿苷元的工艺。研究结果为淫羊藿苷元的制备提供了技术支撑。主要结论如下:1.建立了GH78家族α-L-鼠李糖苷酶TpeRha交联聚集体的制备工艺。以Pluronic F127（聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物F127）为保护剂,用75 mg/m L硫酸铵沉淀及40 mmol/L戊二醛交联TpeRha,得到了α-L-鼠李糖苷酶交联聚集体PAG-R,酶活回收率最高达到60.90%,酶活力为34 U/m L,蛋白固定率为52.15%。PAG-R的最适温度为90℃,最适pH为5.0,与游离酶TpeRha的酶学性质相近,但在不同温度和pH条件下,PAG-R的比酶活更高,而且酶的温度及pH稳定性、鼠李糖耐受性、贮存稳定性显著提高。PAG-R在80℃、pH 6.0、加酶量为4 U/m L的条件下,反应30 min能将1g/L的芦丁完全转化为异槲皮素。与TpeRha相比,在相同条件下,PAG-R催化芦丁生成异槲皮素的量是TpeRha的2.3倍,重复使用10次后,转化率在60%左右。2.建立了环氧树脂固定GH78家族α-L-鼠李糖苷酶TpeRha工艺。论文筛选了11种不同种类的环氧基树脂对TpeRha进行共价固定。通过比较酶蛋白固定率、酶活回收率和固定化酶酶活力等重要指标,建立了适宜的固定化TpeRha的适宜条件:以1.25 mol/L、pH 5.5的柠檬酸为缓冲溶液,在1 m L反应体系中添加0.2 g ES-107T树脂和20 U/m L TpeRha,20℃反应40 h。所得到的固定化酶ES-107T-R的酶活力达到74.61U/g,蛋白固定率为99.63%,酶活回收率为74.61%。ES-107T-R的最适温度为90℃,最适pH为5.0,与游离酶TpeRha相比,具有良好的热稳定性、pH稳定性、鼠李糖耐受性、金属离子耐受性、有机溶剂耐受性及贮藏稳定性。3.通过比较酶蛋白的固定率、酶活回收率、酶的重复利用次数及回收操作难易程度等酶的固定化效果关键指标可知,就目前研究的这两种固定化技术来说,利用环氧树脂ES-107T固定TpeRha更适宜。4.研究了提升环氧树脂固定化酶热稳定性的方法。一定浓度的碱性溶液和甘氨酸溶液能有效提升环氧树脂固定化酶TpeRha的热稳定性。适宜的处理工艺为:将制备好的固定化酶置于1 mol/L pH 8磷酸、20%甘油和10%果糖的混合体系中处理4 d,再用3 mol/L甘氨酸处理24 h。处理后的固定化酶ES-107T-R的90℃半衰期增长至15 h,是不处理的ES-107T-R的2.5倍,是游离酶TpeRha的30倍。在85℃、pH 5.0、底物浓度1g/L、反应时间3 h的条件下,分别用处理后的固定化酶ES-107T-R 35 mg（约2 U/m L）转化柚皮苷、70mg（约4 U/m L）转化芦丁,它们的转化率均能达到100%;重复使用20次后,它们的转化率仍有92.17%和90.12%。5.建立了以固定化酶TpeRha和游离酶Tpebgl3联用转化淫羊藿总黄酮制备淫羊藿苷元的工艺。在pH 5.5,温度80℃条件下,先加15 U/m L固定化酶PAG-R反应2h,再加0.5U/m L葡萄糖苷酶Tpebgl3反应1 h能完全转化底物,得到0.339 mmol/L淫羊藿苷元。在pH5.0,温度80℃条件下,同时加入0.1 g ES-107T-R和0.5 U/m L Tpebgl3反应12h能完全转化底物,得到淫羊藿苷元的含量为0.312 mmol/L。6.比较了固定化酶PAG-R和ES-107T-R在转化淫羊藿总黄酮制备淫羊藿苷元时的催化稳定性。结果表明,鼠李糖苷酶交联聚集体在循环反应10次后,产量仅为初次产量的60%左右,在反应体系为50 m L时重复反应10次后的产量比1 m L体系重复反应10次后的产量产量下降约29.95%;环氧树脂固定化酶ES-107T-R的催化稳定性较高,在循环反应20次时,催化生成淫羊藿苷元的产量仍有初次产量的80%以上,且反应体系扩大50倍后的催化性能维持不变。显然,环氧树脂固定化酶更适宜用于转化淫羊藿总黄酮制备淫羊藿苷元。