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A群链球菌(GAS)是致病性很强的一种链球菌,约90%的链球菌感染疾病都是由GAS引起的,其表面蛋白胶原样蛋白(Scl)是2000年后发现的一种GAS的致病蛋白因子,具有与胶原蛋白类似的特殊结构,分为Scl1和Scl2两种,也称为SclA和SclB。文献报道Scl可以与人的肺上皮细胞、低密度脂蛋白(LDL)以及补体调节蛋白H因子等结合。本研究将主要探索中国医学科学院保存菌株GASCMCC32198的Scl1是否能与人血中的LDL结合,为此类细菌引发疾病的治疗提供实验依据。
本研究利用Primer DSigner软件设计CMCC32198 Scl1及其V区的引物,通过PCR技术扩增GAS的目的基因,基因分别命名为C176和C176—v。将C176,C176—v及pASK—IBA2载体用BSAⅠ酶切后连接,构建了各自的表达载体,将重组基因转入E.Coli BL21,将阳性转化菌培养,取样进行测序分析。测序结果显示,所测序列与GenBank上基因序列号EF042101.1的已知序列同源性为100%。将阳性转化菌用去水四环素诱导表达重组蛋白C176和C176—ν,用Strep—tactin纯化系统进行纯化。利用亲和色谱法(PULL DOWN实验)在人血浆中寻找C176和C176—v的配体,用SDS—PAGE技术和蛋白质免疫印迹分析技术鉴定亲和层析结果,证明其中的一种配体为LDL。通过ELISA技术检测C176和C176—v与LDL的结合能力以及GASCMCC32198活菌与LDL的结合能力。结果证明C176和C176—v都可与LDL特异性结合,GAS CMCC32198通过表面Scl1也可以和人血浆中的LDL结合。本研究的结论是A群链球菌CMCC32198的Ⅰ型胶原样蛋白具有与人LDL结合的特性,且具有浓度依赖性。此研究结果对A群链球菌的致病机理和治疗药物的研究有一定理论意义。