【摘 要】
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[目的]探究鼠尾草酸对MPTP诱导的帕金森模型体内（C57BL/6小鼠模型）和体外（神经元模型）的保护作用。[方法]1.体外培养SH-SY5Y细胞,加入不同药物（药物A、B、C、D、E、鼠尾草酸和溶剂）后,用MPTP损伤细胞,采用细胞活性检测试剂盒（CCK-8）检测处理后的细胞活力,筛选出具有活性的药物（鼠尾草酸）。体外培养SH-SY5Y细胞,分为9个组,分别为对照组、模型组、药物组（CA低、中、
【基金项目】
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国家自然科学基金-地区基金（81960666）；
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[目的]探究鼠尾草酸对MPTP诱导的帕金森模型体内（C57BL/6小鼠模型）和体外（神经元模型）的保护作用。[方法]1.体外培养SH-SY5Y细胞,加入不同药物（药物A、B、C、D、E、鼠尾草酸和溶剂）后,用MPTP损伤细胞,采用细胞活性检测试剂盒（CCK-8）检测处理后的细胞活力,筛选出具有活性的药物（鼠尾草酸）。体外培养SH-SY5Y细胞,分为9个组,分别为对照组、模型组、药物组（CA低、中、高剂量组）、空白对照组和阳性对照组,采用CCK-8试剂盒检测处理后的细胞活力。2.取孕18天的C57BL/6孕鼠,经传递窗进入细胞培养间。将孕鼠脱颈处死后,喷洒75%酒精消毒,然后取出胎鼠,无菌操作下取出胎鼠脑中的海马及皮层,分离纯化神经元。置于培养箱中培养神经元,24小时后半换液（更换培养基一半体积的新鲜培养基）,72小时后加入阿糖胞苷（2.5 mg/L）继续培养,120小时后更换为新鲜B-27 plus neurobasal medium培养基,继续培养。7天后用于实验。将神经元分为9个组。采用细胞活性检测试剂盒（CCK-8）检测神经元活力。在共聚焦显微镜下观察细胞形态,检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量、超氧化物歧化酶（SOD）含量以及丙二醛（MDA）的含量。检测神经元凋亡相关基因caspase-3 mRNA、总caspase-3蛋白和剪切型caspase-3蛋白的表达量。3.将90只C57BL/6雄性小鼠随机分为六组,分别为对照组、药物组（CA低、中、高剂量组）、阳性对照组和阴性对照组（MPTP组）。持续给药28天,每日称量小鼠体重,观察小鼠体重变化情况;采用旷场实验（Open field test）检测造模给药后第1、7、28天小鼠的自主活动水平,采用爬杆实验检测造模给药后第1、7、28天小鼠肢体运动协调水平;采用蛋白免疫印迹实验（Western Blot）分析各组小鼠脑内在造模给药后第1、7、28天酪氨酸羟化酶（TH）、α-突触核蛋白（α-Synuclein）以及caspase-3蛋白的表达情况。[结果]1、鼠尾草酸可以保护MPTP诱导的SH-SY5Y细胞损伤;鼠尾草酸可以保护MPTP诱导的神经元损伤,减少培养液中LDH漏出,减少胞内MDA的生成,增强SOD活性,阻止caspase-3 mRNA及剪切型caspase-3的异常激活。2、MPTP造模后帕金森病小鼠的体重减轻,鼠尾草酸能部分改善MPTP诱导的帕金森病小鼠的体重减轻;鼠尾草酸能增加帕金森病小鼠自主活动水平以及改善帕金森病小鼠的肢体运动协调水平;能改善帕金森病小鼠脑内α-Synuclein、caspase-3 mRNA、TH 蛋白表达异常。[结论]1、鼠尾草酸能保护MPTP诱导的SH-SY5Y细胞和多巴胺神经元损伤,其机制可能与抑制神经元氧化损伤,阻止caspase-3异常升高有关。2、鼠尾草酸能改善MPTP诱导的帕金森小鼠模型的病理改变,改善行为异常,其机制可能与抑制神经元氧化损伤,阻止凋亡相关蛋白caspase-3异常升高有关。
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