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第一部分改良兔腹主动脉粥样斑块模型的建立[目 的]利用改良的早期高脂喂养-球囊损伤-免疫损伤联合法制备兔腹主动脉粥样斑块模型,并对模型制备情况进行评价。寻找一种高效的斑块模型建立方法,为后续斑块的造影及靶向治疗奠定基础。[方法]选取雄性新西兰兔120只,分为早期喂养组和晚期喂养组,各60只。早期喂养组:1月龄的实验兔60只,其中EF（early feeding）组30只,仅进行高脂喂养和球囊损伤;EFI（early feeding and immune）组30只,在高脂喂养和球囊损伤的基础上加入免疫损伤。晚期喂养组:4月龄的实验兔60只,其中LF（late feeding）组30只,仅进行高脂喂养和球囊损伤;LFI（late feeding and immune）组30只,在高脂喂养和球囊损伤的基础上加入免疫损伤。首先对所有实验兔行12周的高脂喂养,于第12周末对兔腹主动脉的内膜进行球囊损伤,并对EFI组和LFI组的实验兔注射牛血清白蛋白进行免疫损伤,继续对所有实验兔进行8周的高脂喂养。对造模过程共20周内四组实验兔的生存情况进行Kaplan-Meier生存分析。对造模开始前、高脂喂养后（第12周末）、造模成功后（第20周末）四组实验兔的血脂指标甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein-C,LDL-C）进行检测。于第20周末对四组实验兔的腹主动脉斑块进行二维超声成像、彩色多普勒血流成像（colordoppler flow imaging,CDFI）及病理学检查。[结 果]1.模型制备情况120只实验兔共存活93只,其中80只存在动脉粥样硬化斑块。EF组、EFI组、LF组和LFI组的造模成功率分别为70.0%、66.7%、66.7%、63.3%。2.Kaplan-Meier 生存分析EF组和LF组、EFI组和LFI组实验兔生存率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）,EF组和EFI组、LF组和LFI组实验兔生存率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。3.病理组织学检查大体油红O染色显示斑块面积比（斑块面积/内膜总面积）:EFI组>EF组>LFI组>LF组（P<0.05）;油红O染色、天狼猩红染色、Masson染色分别观察到斑块内含有脂质细胞、纤维及平滑肌成分。显微镜下的斑块面积比（斑块的表面积/内膜的表面积）:EFI组>EF组>LFI组>LF组（P<0.05）。4.血脂情况同一实验组不同喂养时间（造模开始前、高脂喂养后、造模成功后）兔血脂指标（TC、TG、LDL-C）比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,且随着喂养时间的延长,各指标均呈升高趋势（P<0.05）。同一喂养时间不同实验组（EF组、EFI组、LF组、LFI组）兔血脂指标（TC、TG、LDL-C）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。5.斑块的二维超声评价第20周末四组兔腹主动脉的内-中膜复合体厚度（intimal-medial thickness,IMT）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）,对斑块最大厚度（Thickness）进行比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,且EFI组>EF组>LFI组>LF组（P<0.05）。[结 论]早期高脂喂养和免疫损伤对实验兔的生存率均不会产生影响,但早期高脂喂养的造模效果要优于晚期,加入免疫损伤的造模效果要优于无免疫损伤,即早期高脂喂养-球囊损伤-免疫损伤联合法是一种高效的动脉粥样斑块模型建立方法。第二部分炎症介导的靶向微泡对斑块稳定性的作用[目 的]制备携白介素-8（interleukin-8,IL-8）单克隆抗体的靶向微泡并对其特异性黏附效能进行评价,探讨其在评价兔腹主动脉斑块内炎症中的价值。探讨携IL-8单克隆抗体的超声靶向微泡破坏（ultrsound-targeted microbubble destruction,UTMD）技术对斑块稳定性的作用。[方法]1.应用“生物素-亲和素”桥接法将生物素化的IL-8单克隆抗体偶联到USphere Labeler微泡造影剂上,构建携IL-8单抗的靶向微泡。利用平行板流动腔实验检测靶向微泡的特异性黏附效能,备后期的靶向超声造影。2.选取第一部分造模成功的实验兔（第20周末）,各造模方式组内随机平均分为靶向组（EF1组、EFI1组、LF1组和LFI1组）和裸微泡组（EF0组、EFI0组、LF0组和LFI0组）。靶向组:采用携IL-8单抗的靶向微泡作为造影剂;裸微泡组:采用USphere Labeler裸微泡作为造影剂。对实验兔进行超声造影（contrast-enhancedultrasound,CEUS）后利用TOMTEC软件描绘斑块内的时间-信号强度曲线,得出斑块的最大峰值强度（maximumintensity,IMAX）和达峰时间（time to peak,TTP）。利用免疫组化染色对斑块内的微血管密度（microvessel density,MVD）（抗CD34免疫组化染色）及巨噬细胞（抗CD68免疫组化染色）进行观察及计数。3.经超声造影和标本取材后,将剩余的实验兔随机平均分为三组,即空白对照组、单纯辐照组及靶向治疗组。单纯辐照组:于第20周末至28周末每隔一周利用超声靶向微泡破坏（UTMD）技术对斑块进行一次靶向治疗,注射USphere Labeler裸微泡。靶向治疗组:于第20周末至28周末每隔一周利用超声靶向微泡破坏（UTMD）技术对斑块进行一次靶向治疗,注射携IL-8单抗的靶向微泡。空白对照组:不进行任何操作。治疗过程中所有实验兔均给予普通饲料喂养。4.于治疗前（第20周末）、治疗中（第24周末）及治疗后（第28周末）对各组实验兔的血脂指标、血清IL-8含量、斑块的二维及超声造影参数、病理学参数进行测定。超声造影参数获得于靶向治疗后的30 min,所有实验兔均采用携IL-8单抗的靶向微泡。[结果]1.靶向超声造影评价斑块内炎症1.1靶向微泡特异性黏附效能的评价携IL-8单抗的靶向微泡能够与平行板流动腔内的IL-8抗原特异性黏附,在剪切应力为0.2dyn/cm2时靶向微泡的特异性粘附效能最大,在剪切应力为0.4dyn/cm2时粘附效能出现明显减低,在剪切应力为0.5dyn/cm2时降到最低。1.2斑块的超声造影在同一造模方式组内,各靶向组斑块的最大峰值强度（IMAX）均高于裸微泡组（P<0.05）,靶向组和裸微泡组斑块达峰时间（TTP）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。在不同造模方式组间,各靶向组斑块的最大峰值强度（IMAX）:EFI1组>EF1组>LFI1组>LF1组（P<0.05）,达峰时间（TTP）:LF1组>LFI1组>EF1组>EFI1组（P<0.05）;各裸微泡组斑块最大峰值强度（IMAX）:EFI0组>EF0组>LFI0组>LF0组（P<0.05）,达峰时间（TTP）:LF0组>LFI0组>EF0组>EFI0组（P<0.05）。1.3病理组织学检查不同造模方式组间斑块内MVD和巨噬细胞计数比较:EFI组>EF组>LFI组>LF组（P<0.05）。1.4相关性分析各组斑块的最大峰值强度（IMAX）与微血管密度（MVD）、最大峰值强度（IMAX）与巨噬细胞计数、微血管密度（MVD）与巨噬细胞计数均具有强相关性（P<0.05）。2.超声靶向微泡破坏（UTMD）技术对斑块稳定性的作用2.1血脂情况同一实验组各治疗阶段（第20周、24周、28周）兔血脂指标（TC、TG、LDL-C）均随治疗的进展逐渐减低:第20周>第24周>第28周（P<0.05）。同一治疗阶段各实验组（空白对照组,单纯辐照组及靶向治疗组）兔血脂指标（TC、TG、LDL-C）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。2.2斑块的二维超声评价同一实验组（空白对照组及单纯辐照组）各治疗阶段（第20周、24周、28周）内-中膜复合体厚度（IMT）、最大斑块厚度（Thickness）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;靶向治疗组第28周两参数（IMT、Thickness）均小于第20周（P<0.05）,第20周与第24周、第24周与第28周两参数比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。在同一治疗阶段（第20周及第24周）,各实验组（空白对照组,单纯辐照组及靶向治疗组）内-中膜复合体厚度（IMT）、最大斑块厚度（Thickness）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;第28周靶向治疗组两参数（IMT、Thickness）均小于空白对照组及单纯辐照组（P<0.05）,且空白对照组和单纯辐照组间两参数（IMT、Thickness）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。2.3斑块的靶向超声造影评价同一实验组（空白对照组及单纯辐照组）各治疗阶段（第20周、24周、28周）斑块最大峰值强度（IMAX）和达峰时间（TTP）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;靶向治疗组斑块最大峰值强度（IMAX）随治疗的进展逐渐减低:第20周>第24周>第28周（P<0.05）,达峰时间（TTP）随治疗的进展逐渐延长:第20周<第24周<第28周（P<0.05）。第20周各实验组（空白对照组,单纯辐照组及靶向治疗组）斑块最大峰值强度（IMAX）和达峰时间（TTP）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;在同一治疗阶段（第24周及第28周）,靶向治疗组斑块最大峰值强度（IMAX）均低于空白对照组及单纯辐照组（P<0.05）,达峰时间（TTP）均高于空白对照组及单纯辐照组（P<0.05）,两治疗阶段空白对照组和单纯辐照组斑块的两造影参数（IMAX、TTP）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。2.4血清IL-8含量同一实验组（空白对照组及单纯辐照组）各治疗阶段（第20周、24周、28周）兔血清IL-8含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;靶向治疗组兔血清IL-8含量随治疗的进展逐渐降低:第20周>第24周>第28周（P<0.05）。第20周各实验组（空白对照组,单纯辐照组及靶向治疗组）兔血清IL-8含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;在同一治疗阶段（第24周及第28周）,靶向治疗组兔血清IL-8含量均低于空白对照组及单纯辐照组（P<0.05）,两治疗阶段空白对照组和单纯辐照组兔血清IL-8含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。2.5病理组织学检查同一实验组（空白对照组及单纯辐照组）各治疗阶段（第20周、24周、28周）斑块的微血管密度（MVD）和巨噬细胞计数比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;靶向治疗组斑块的微血管密度（MVD）和巨噬细胞计数均随治疗的进展逐渐减低:第20周>第24周>第28周（P<0.05）。第20周各实验组（空白对照组,单纯辐照组及靶向治疗组）斑块的微血管密度（MVD）和巨噬细胞计数比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;在同一治疗阶段（第24及第28周）,靶向治疗组斑块的微血管密度（MVD）和巨噬细胞计数均低于空白对照组及单纯辐照组（P<0.05）,两治疗阶段空白对照组和单纯辐照组斑块的两参数（MVD、巨噬细胞计数）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。[结 论]应用“生物素-亲和素”桥接法可成功制备携IL-8单克隆抗体的靶向微泡,微泡的特异性黏附效能良好。靶向超声造影通过定量分析斑块最大峰值强度（IMAX）,可间接反应斑块内的微血管密度（MVD）和巨噬细胞数目,实现斑块内炎症反应程度的无创和定量评价。炎症介导的UTMD可通过中和斑块局部的炎症因子,有效减轻斑块内的炎症反应,抑制斑块内新生血管的生成,减少巨噬细胞的数目,为临床寻找安全、高效的稳定斑块的方法提供了新思路。