根结线虫（Meloidogyne spp.）是一种重要的植物寄生线虫,因其分布范围广,危害严重而被世界各国所关注。目前由于化学农药的长期使用出现3R问题,越来越多研究者将目光转向生物防治。桔绿木霉菌（Trichoderma citrinoviride）Snef1910是由本实验室前期筛选得到的一株高效防控根结线虫的生防真菌。为使木霉菌成为防治根结线虫病害的生物制剂产品应用于农业生产,本文对其进行深入研究,利用响应面法优化了桔绿木霉菌Snef1910产厚垣孢子的发酵条件,研究了获得木霉孢子粉工艺流程和使用剂量,并对木霉菌肥有机载体进行筛选,在田间验证其防效。主要研究结果如下:1.响应面法优化桔绿木霉菌Snef1910产厚垣孢子发酵条件研究:从10种培养基中筛选出桔绿木霉菌产厚垣孢子的种子培养基,通过单因素试验和Plackett-Burman试验设计选出影响厚垣孢子产生的液体发酵关键因素,并通过最陡爬坡试验和Box-Behnken响应面法确定影响厚垣孢子产生的关键因素水平。筛选获得桔绿木霉产厚垣孢子最优基础培养基为麦麸培养基,单因素试验获得最佳碳源为蔗糖、氮源为蛋白胨、无机盐为KH₂PO₄。响应面法中心组合试验获得最佳液体发酵条件为:接菌量3.62%,装液量29.2%,麦麸含量30 g/L,蔗糖含量4.52 g/L,蛋白胨含量2.62 g/L,初始pH 3.04。使用优化的发酵条件对桔绿木霉菌进行发酵,在摇瓶中可产生厚垣孢子5.90×10⁷个/mL,在发酵罐中可产生5.11×10⁷个/mL,比未优化前麦麸培养基厚垣孢子产孢数量提高了约12倍。2.桔绿木霉菌孢子粉的制备:将获得的桔绿木霉菌分生孢子粉和厚垣孢子粉进行常温定期存活率测定,随存储时间的延长孢子存活率降低,厚垣孢子存储10个月时存活率仍为70%左右,而分生孢子在第6个月活力就开始下降至51.52%,第10个月降低为14.55%。土壤中孢子粉含量0.3%-0.5%时对南方根结线虫具有显著防效的同时对植株生长无抑制作用,而超过0.5%用量会造成植株生长缓慢,过高会造成植株死亡。3.桔绿木霉菌肥的研制及田间防效试验:将桔绿木霉孢子粉分别与5种不同生物有机肥混用,通过田间试验和盆栽试验筛选得到生物炭和麦麸2种有机肥有增强木霉孢子粉防效的作用,其中生物炭木霉菌肥对南方根结线虫相对防效最高可达82%,麦麸木霉菌肥相对防效达67%,两者均显著增加了番茄的株高和地上部鲜重。两年的温室田间试验结果表明,两种菌肥均能显著降低南方根结线虫在番茄植株根系的侵染量,番茄根系卵囊和土壤中二龄幼虫数量显著减少,其中生物炭木霉菌肥对南方根结线虫相对防效高于麦麸木霉菌肥,分别为77.40%和58.76%;两种菌肥处理番茄的株高和产量显著提高,单株番茄产量分别提高6.54%和7.14%。将两种菌肥用于甜瓜盆栽试验,结果发现在甜瓜上取得了和番茄相似的试验结果,两种菌肥均可有效控制南方根结线虫同时促进了甜瓜地上部生长。其中生物炭木霉菌肥处理甜瓜防治效果为77.48%,高于阿维菌素（60.37%）和麦麸木霉菌肥处理（44.44%）。4.桔绿木霉菌肥对甜瓜根围土壤微生物的影响:为研究木霉菌肥对土壤微生物的影响,采集盆栽甜瓜根系周围土壤,利用Biolog-ECO方法测定其微生物多样性。结果表明:与空白对照组相比,生物炭和麦麸两种木霉菌肥处理的土壤微生物活性、微生物群落多样性指数如Shannon、Simpson和McIntosh指数均无显著性差异;对4类碳源利用能力也基本相同,显著增加了对脂类的利用率而降低了对酸类的利用率。而阿维菌素处理的土壤微生物活性和几个多样性指数均显著降低,除胺类外对其他5类碳源的利用能力也均显著低于空白对照和木霉菌肥处理组。研究结果表明,研制的生物炭和麦麸木霉菌肥处理不但能够显著控制南方根结线虫的种群数量,而且对盆栽甜瓜根围土壤微生物菌群的活性和多样性也无影响,本研究为桔绿木霉生防菌的开发和应用提供了理论研究数据。