米根霉细胞发酵L-乳酸的研究

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微生物细胞具有高度适应环境和繁殖能力,细胞的各种结构能协调地进行工作,合成某些代谢产物,因此,如何利用微生物细胞的代谢控制有效地解决我国当前面临的粮食、能源和环境等方面的问题具有极其深远的意义。尤其是受到日益重视生物可降解性材料聚乳酸的前体乳酸的生产,更加受到人们的关注。  本文通过研究米根霉细胞代谢控制发酵基本条件,以期实现乳酸生产的连续化、扩大化以及寻求L-乳酸生产的新原材料,促进可持续性的L-乳酸产业化生产。  首先,以目前工业上普遍采用的淀粉为原料,通过对海藻酸钙包埋法和聚乙烯醇丝吸附法两种固定方法的比较可以得出,海藻酸钙包埋法虽然可以缩短发酵周期,但是凝胶珠易于软化、破碎,无法适应连续化生产的要求,而聚乙烯醇丝本身的结构性质决定了其可以满足工业上的连续使用,本文进一步对PVA吸附法固定化米根霉细胞发酵生产 L-乳酸的工艺进行了研究,探讨了载体的添加量、发酵时间等方面的固定化发酵工艺,并进行了优化。  本着充分利用资源,实现产品的最大值的原则,本文还选用了自然界最主要的碳水化合物储存物—植物生物质作为发酵的原材料,并以固态发酵形式生产乳酸。通过对多项预处理方法的比较,选择了较符合本试验的蒸汽爆破方法处理秸秆,而后经物理化学预处理,实现天然纤维素的组分分离。  利用纤维素酶对预处理后的纤维素进行水解,通过对酶解条件中底物浓度、加酶量、酶解时间等研究,表明在50℃、pH值4.8条件下,底物浓度为3.3%,加酶量为2%,酶解60h可以得到的还原糖的浓度达到34.95g/L,对米根霉生长所需的部分金属离子对酶活性的影响作了研究发现,各种菌体生长的无机盐对酶活性的影响程度不相同。  鉴于纤维素酶作用温度和米根霉生长温度的较大差异,通过各种发酵方法的比较,本文采用改进后的同步糖化发酵,即变温同步糖化发酵。250mL三角瓶中装有48.8mL柠檬酸缓冲液和2g预处理后秸秆,配入KH2PO40.3g/L;MgSO4.7H2O0.25g/L;ZnSO4.7H2O0.08g/L,121℃灭菌20min后,加入1.2mL纤维素酶于50℃酶解18h后,接入米根霉种子,35℃、180r/min摇床内发酵10h后加入1gCaCO3,5d可达到52.7%的乳酸转化率。
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