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自转基因生物问世以来,许多农业公司利用包括转基因技术在内的现代生物技术开发出了很多新的植物品系。由于转基因存在的安全性问题使得转基因生物产品的标签问题成为公众关注的主要热点,标识制度的推行增加了消费者的知情权和选择权,目前已有30个国家制定了相应的法律法规对转基因作物及其衍生产品进行标签,而标识制度的有效监督和实施在某种程度上依赖于转基因检测水平的不断提高。目前,许多未经标签和认证的转基因生物及其深加工产品可能已经进入中国市场,这就迫切需要合适的检测手段以确定这些食品中是否含有转基因成分。 实时荧光定量PCR技术,是近几年发展起来的一项分子生物学检测技术,由于它使用了荧光标记,提高了检测的准确性和灵敏度,不需对PCR产物进行后期处理,避免了交叉污染,克服了以往PCR技术中存在的假阳性污染和不能进行准确定量的缺点,同时也提高了检测速度和自动化程度,目前已经被广泛的应用于很多领域之中。 本文以转Bt基因抗虫水稻和转基因抗虫玉米MON810为研究材料,分别从定性和定量PCR检测两个方面建立了有效的转基因检测技术体系。论文工作取得的主要研究结果如下: 1、以转Bt基因“克螟稻”为材料,利用普通CTAB法和DNA提取试剂盒分别对其提取DNA,比较显示:试剂盒法明显优于普通CTAB法,能满足荧光定量PCR检测对模板DNA的要求。 2、在定性检测的基础上,用Taqman探针法对转Bt基因水稻的NOS和Bt外源基因进行了荧光定量检测分析,并成功地对自配已知浓度的转基因水稻进行了定量检测,检测值与实际值较为接近,检测下限为0.05％,表明该体系具有较高的准确度和灵敏度。 3、针对转基因抗虫玉米MON810的转化事件序列设计特异探针和引物,通过优化实验对其荧光定量检测体系进行分析,建立了玉米MON810的最佳检测体系。 4、利用上述特异探针和引物,对MON810和其它转基因玉米品系T25、Bt11、Bt176同时进行定量分析,结果显示:只有MON810有荧光信号,说明该体系具有很好的品系特异性。