过敏性疾病,又称变态反应性疾病(简称变应性疾病),在近几十年里发病率显著上升,成为全球关注的公众卫生健康问题。随着现代工业的发展和生活环境的污染,其发病率也呈现出逐年上升的趋势,而且由于其反复发作而难以根治,成为近年来研究的热点[1]。玉屏风散是中医益气固表治法的代表方剂,主要用于风寒感冒,同时临床上也广泛应用于治疗过敏性鼻炎,哮喘,荨麻疹等过敏性疾病,其优势在于减少复发,关于作用机制多数的研究集中在调节Th1/Th2平衡,但并不能很好地解释该方临床抗过敏性疾病复发的机制,从启动阶段探索玉屏风散的作用可能是揭示其机制较好的切入点。本实验室前期研究表明玉屏风散提取物对Th2型的小鼠变应性接触性皮炎有抑制作用,而我们查阅近些年文献发现在Th2型变应性疾病中有一种新发现的重要启动因子-胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),于是我们设想建立Th2型过敏性炎症致敏初期TSLP产生模型来进一步研究玉屏风散对Th2型变态反应性炎症早期的抑制作用,并对其调控TSLP的产生机制进行初步探讨。研究思路与方法:1.动物模型的建立:Th2型小鼠变应性接触性皮炎模型(ACD模型):用1.5%FITC溶液涂于小鼠腹部皮肤使其致敏(诱导相),6天后用0.5%FITC溶液攻击其耳部皮肤(激发相)致使耳组织产生变态反应性炎症,以肿胀度来评价变态反应性炎症的程度。Th2型过敏性炎症致敏初期TSLP产生模型(TSLP产生模型):连续两天用0.5%FITC溶液攻击其耳部皮肤致使耳组织产生大量的TSLP。成功建立TSLP产生模型的目的是为探索药物对Th2型变应性疾病启动阶段作用机制提供可靠的方法。2.玉屏风散提取物对Th2型过敏性炎症致敏初期TSLP的影响此部分主要观察玉屏风散提取物对皮炎模型启动阶段TSLP的作用,主要用ELISA、Real-timePCR 及 Western-blot 方法考察其对 TSLP 及其受体 TSLPR 在mRNA和蛋白水平的影响。若玉屏风散对TSLP有抑制作用,则说明玉屏风散对Th2型过敏性炎症的抑制作用在炎症启动阶段就已产生了抑制性干预作用。这部分的目的主要是探索玉屏风散提取物是否抑制了变态反应的启动因子 TSLP及其受体TSLPR而发挥治疗变应性接触性皮炎的作用。3.玉屏风散提取物对TSLP产生模型中TSLP产生通路相关因子的影响若玉屏风散提取物对TSLP有抑制作用,那么是通过哪些途径发挥抑制作用的呢,这部分的目的就是探索玉屏风散提取物调控TSLP表达的途径。主要观察玉屏风散提取物对TSLP产生通路的作用,运用Real-time PCR和Western-blot方法考察玉屏风散提取物对TSLP产生通路上TLRs(TLR2,TLR3,TLR4,TLR8,TLR9)、NF-κB及TLRs的转接蛋白MyD88和TIRAP,及负调控TSLP表达的Notch信号通路表达的影响。结果:1.FITC诱导小鼠Th2型过敏性炎症致敏初期TSLP产生模型的建立与小鼠ACD模型不同,TSLP产生模型在体征表现上耳厚度未见明显变化;胸腺指数和脾脏指数也未见明显变化。这提示在ACD致敏初期,致敏部位的炎症表征尚不明显;且免疫器官胸腺、脾脏在此阶段还未参与ACD的病理过程或者说此阶段免疫器官受到的刺激还不足以在其指数上看到变化。而在TSLP水平达到较高水平,而ACD全程模型中TSLP表达已不再明显升高且其受体TSLPR也表现出高表达,显示在变应性接触性皮炎致敏初期是TSLP高表达的时期,因此建立此模型成功。2.玉屏风散提取物对小鼠Th2型过敏性炎症致敏初期TSLP及TSLPR的影响玉屏风散提取物对ACD诱导初期TSLP有抑制作用,其中临床等效量(6.5g生药/kg)的抑制作用显著。玉屏风散使小鼠耳组织中TSLP蛋白水平显著下调,对TSLP mRNA水平也有明显下调作用;对其受体TSLPR的mRNA和蛋白水平都有明显的下调作用。显示玉屏风散在过敏性炎症启动阶段就已产生了抑制性干预作用。3.玉屏风散提取物对小鼠Th2型过敏性炎症致敏初期耳组织中TSLP产生通路相关因子的影响玉屏风散提取物对TSLP产生模型耳组织中TSLP产生通路TLR2、TLR3、TLR4、TLR8 mRNA表达有明显的下调作用,对TLR9和NF-κB mRNA表达未见显著影响;对TLRs的转接蛋白TIRAP和MyD88的蛋白表达有下调作用。玉屏风散对TSLP产生模型耳组织Notch信号中Notch1的mRNA水平有下调作用,对其蛋白表达有上调作用;对Jagged1的mRNA水平上调作用,但对其蛋白表达未见显著影响。结论:玉屏风散提取物对小鼠Th2型过敏性炎症的抑制作用与调控Th2型炎症启动因子TSLP的表达有关,其机制可能是通过抑制TSLP的产生通路TLRs及相应的转接蛋白的表达,从而抑制致敏初期TSLP及其受体TSLPR的表达。