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血管生成(angiogenesis)是指机体内一种生理、病理现象。正常的血管生成被严格控制于某些短暂、特定的生理过程，如生殖过程、发育过程和伤口愈合过程；持续的血管生成是某些病理改变如肿瘤的特性。肿瘤是一种血管生成依赖性疾病，原发性肿瘤的生长、侵袭和转移都需要新生血管的生成。早期研究表明，肿瘤的生长有两个明显不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段。无血管的肿瘤通过组织间液获取从毛细血管渗透的营养物质，细胞增殖缓慢，原发肿瘤的体积不会超过1～2mm~3，这种状态称血管前期；血管化的浸润生长期是一个多步骤多分子参与的癌细胞与宿主细胞间相互作用的复杂连续过程，包括原发瘤增殖、肿瘤新生血管生长；侵袭基底膜，在循环系统形成瘤栓并转移到靶器官，肿瘤血管形成，转移癌灶增殖。近年研究表明，肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因，大量实验证明，多种肿瘤包括实体瘤和血液肿瘤的生成、转移、复发和预后均与肿瘤血管生成密切相关，因此，以肿瘤血管生成为靶点，开发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个新的十分活跃的研究领域。 青蒿琥酯(Artesunate，Art)是我国科学家从菊科植物黄花蒿(Artemisiaannua L.)中提取的具有过氧桥结构的倍半内酯类抗疟药，在临床上对抢救和治疗脑型疟和恶性疟等疗效显著。鉴于其化学结构中含有过氧桥，近年来有不少关于青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡的报道，认为该药在组织有可能释放氧的机制。但有关青蒿琥酯抑制血管生成而抑制肿瘤作用仅见于本课题组的报道。本文在前期浙江大学硕士论文工作基础上，采用大鼠假孕模型，检测青篙唬酷对蜕膜瘤和骨髓微血管生成和VEGF因子表达的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜模型，检测青篙唬醋对鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的影响，并比较青篙唬酷对生理性血管生成与肿瘤新生血管生成的敏感性;同时采用动脉环无血清培养观察青篙唬酷对新生血管生长、迁移、发育过程的干扰作用。从不同角度验证青篙玻醋对血管生成及肿瘤血管新生的抑制效应，为进一步研究青篙墟醋的抗新生血管生成作用以及抑制肿瘤细胞生长和浸润的作用机制提供导向性实验资料。1、青高玻酣对假孕大鼠蜕膜瘤和骨做血管生成的影响.1对假孕大鼠蜕膜瘤和骨髓的血管密度的影响 在假孕大鼠蜕膜瘤实验中，青篙墟醋高剂量组(80mg/kg.d)、中剂量组(40mg/kg.d)和低剂量组(ZOmg/kg.d)皮下注射给药5天后，蜕膜瘤和骨髓的血管密度分别为5.2士3.8，3.4士2.1;10.4士4.3，5.6士2.5;16.8士3.3，8.6士2.1。溶剂对照组分别为15.4士3.8，10.0士2.2，高中剂量组血管计数均明显少于溶剂对照组(P<0.01)，低剂量组与溶剂对照组相似(P>0.05)。.2对假孕大鼠蜕膜瘤和骨髓耗GF表达的影响 用药组与溶剂对照组VEGF的表达如Figl，FigZ。高剂量组(80mg/kg.d)、中剂量组(40mg/kg.d)、和低剂量组(20mg/kg.d)在蜕膜瘤和骨髓中的vEGF免疫组化染色阳性率与对照组相比呈显著性差异(P<0.05)。见Tabl。2青篙琉醋抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响2.1对鸡胚存活率观察在鸡胚绒毛尿囊膜模型中，青篙唬醋在不同剂量时(80 pg/胚、60 pg/胚、浙江大学硕士论文30 pg/胚、15 pg/胚)存活率分别为56.4%、93.8%、100%、100%;溶剂对照组存活率为100%，阳性溶剂对照组(氢化可的松)存活率为93.5%。当浓度>30 pg/胚时，存活率下降。高剂量组与溶剂对照组相比，呈显著性差异(P<0.05)。其余给药组与阳性对照组间无差异(P>0 .05)。2.2在鸡胚绒毛尿囊膜对肿瘤细胞诱导血管生成的影响 对鸡胚绒毛尿囊膜给药48h后，不同剂量(60 pg/胚、30 pg/胚、1 5 pg/胚、7.5 pg/胚)青篙唬酷的血管数分别为3.8士1.6、9.7士2.7、27.1士8.5、38.7士8.2;溶剂对照组为40.6士2.3，阳性对照组(氢化可的松)为19.5士2.7。高、中剂量组和阳性对照组的血管数明显少于溶剂对照组，高中剂量用药组的血管数明显少于阳性对照组(P<0.01)。低剂量组(7 .5 pg/胚)与溶剂对照组相似(P)0 .05)。 接种MCF一7、K562细胞24h后，给予不同剂量的青篙唬酷(30 pg/胚、巧协g/胚、7.5，g/胚)，48h后血管数分别为13.4士4.9、15.1士4.2;32.3士4.5、30.4士4.8;42.2士5.5、39.2士5.4;正常溶剂对照组为40.6士2.3，接种MCF一7溶剂对照组为52.0士6.3，接种K562细胞为54.6士6.0。不同浓度Art与对应溶剂对照组比较均明显减少(P<0.01)。2 .3对鸡胚绒毛尿囊膜微血管形态及肿瘤细胞生长及浸润的影响 在鸡胚绒毛尿囊膜，溶剂对照组血管内皮细胞完整，排列整齐;给药组血管内皮细胞脱落、变性，高剂量组血管甚至出现炎症细胞侵润。 将接种MCF刀细胞、K562细胞的鸡胚绒毛尿囊膜原位铺片及组织切片HE染色光镜下观察发现，肿瘤细胞可透过鸡胚绒毛尿囊膜从膜外浸润入膜内，给予Art后，进入鸡胚绒毛尿囊膜内的细胞数明显减少，分布稀疏。3青高玻醋对离体大鼠主动脉环血管生成的影响3.1对主动脉环血管密度的影响浙江大学硕士论文 在大鼠主动脉体外培养血管生成实验模型中，青篙唬醋高剂量组 (巧陀/w ell)和低剂量组(7 .5瑰/well)的