研究背景与目的：　　 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一种高发于我国华南地区的头颈部肿瘤，其发生与环境、遗传、EB病毒感染等因素密切相关。EB病毒是一种人疱疹病毒，鼻咽癌细胞中潜伏感染的EB病毒能产生一系列基因：EB病毒核抗原1(EBNA1)、潜伏膜蛋白(LMP1，LMP2A，LMP2B)、EB病毒编码小RNA(EBERs)。其中，潜伏膜蛋白1(LMP1)是一种被公认的癌基因，在鼻咽癌中它能通过激活NF-κB、AP-1及JAK/STAT等信号通路产生多种病理效应(例如促进细胞成长增殖、促进转移、抑制凋亡等)促使肿瘤发生发展。因此，探讨与LMP1相关的信号通路对于明确鼻咽癌致瘤机制意义重大。　　 雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamacin，mTOR)是一种进化保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，通过调节核糖体合成和蛋白翻译来调控细胞生长和增殖。PI3K/AKT是mTOR信号通路中重要的上游信号分子；真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(eukaryotic initiation factor4E(eIF4E)-binding protein，4E-BP1)和核糖体蛋白S6激酶(ribosomal protein S6 kinases，P70S6K)则是该信号通路两个重要的下游靶蛋白。　　 为了进一步明确鼻咽癌中LMP1调控的信号通路，本研究拟阐明鼻咽癌中LMP1与mTOR信号通路之间的关系，同时研究LMP1、p-mTOR、p-P70S6K和p-4EBP1在鼻咽癌组织中的表达情况，并探讨各基因表达与临床病理资料的关系及其预后意义。　　 方法：　　 应用人全基因组表达谱芯片检测鼻咽癌稳定转染LMP1细胞株HONE1-LMP1/HONE1-Vector，筛选与LMP1基因相关的差异表达基因。通过与KEGG数据库比对，得到差异基因相关的信号通路。应用定量PCR方法验证芯片结果。　　 运用Western blot方法检测鼻咽癌细胞株HONE1、6-10B瞬时转染或稳定转染LMP1基因后，mTOR信号通路各信号分子的蛋白表达情况；采用RNA干扰方法沉默鼻咽癌细胞株C666-1中LMP1基因后，运用免疫荧光方法检测该细胞中LMP1及mTOR信号通路各信号分子的蛋白表达情况。　　 采用免疫组化方法检测230例鼻咽癌组织中LMP1、p-mTOR、p-P70S6K和p-4EBP1的表达情况，并用SPSS16.0软件分析各基因与临床病理资料的关系及其预后意义。　　 结果：　　 1.基因表达谱芯片分析得到鼻咽癌稳定转染细胞株HONE1-LMP1中LMP1调控的差异表达基因　　 将鼻咽癌细胞系HONE1稳定转染B95.8-LMP1真核表达质粒后进行人全基因组芯片分析，共得到1533个LMP1调控的差异表达基因(上调基因1034个，下调基因499个)。通过与KEGG数据库比对，把这些差异基因按照通路重新聚类分析，获得数条信号通路。其中，与mTOR信号通路相关的差异表达基因经定量PCR验证，其差异表达情况与芯片结果完全一致。　　 2.鼻咽癌细胞系中LMP1调控mTOR信号通路基因　　 经免疫印迹证实，鼻咽癌稳定转染细胞株HONE1-LMP1中，LMP1能够上调mTOR信号通路上游分子p-AKT和p-mTOR以及下游信号分子p-P70S6K和p-4EBP1。同时，在瞬时转染LMP1质粒的鼻咽癌细胞系6-10B中，LMP1亦能正向调控这些信号分子。　　 反之，在EBV阳性表达的鼻咽癌细胞系C666-1中沉默LMP1基因后，经免疫荧光显示，mTOR信号通路分子p-mTOR和p-4EBP1均表达下调。　　 3.鼻咽癌组织中LMP1及mTOR信号通路基因的表达与临床病理资料的相关性　　 在鼻咽癌组织中LMP1的阳性表达部位主要位于肿瘤细胞胞浆，部分位于胞膜，其阳性表达率为62.9％(141/224)；p-mTOR和p-P70S6K的阳性表达均定位于肿瘤细胞胞浆，其阳性表达率分别为48.9％(109/223)和47.3％(106/224)；p-4EBP1的阳性表达主要位于肿瘤细胞胞浆，部分位于胞核，其阳性表达率为57.4％(128/223)。　　 p-mTOR的高表达与淋巴结转移(p=0.004)及复发(p=0.021)密切相关；p-P70S6K的高表达与远处转移密切相关(p=0.033)；p-4EBP1高表达与与淋巴结转移密切相关(p=0.045)。而LMP1的表达与各临床资料均无明显相关性。经过Spearman's相关性分析，LMP1高表达分别与p-mTOR(r=0.359，p＜0.001)、p-P70S6K(r=0.293，p＜0.001)和p-4EBP1(r=0.290，p＜0.001)的高表达均密切相关。　　 4.鼻咽癌组织中LMP1及mTOR信号通路基因的预后意义　　 鼻咽癌组织中，LMP1高表达组和低表达组患者5年总生存率分别为54％和68％，两组间总生存率差异显著(p=0.020)；p-mTOR高表达组和低表达组患者5年总生存率分别为55％和62％，两组间总生存率无明显差异(p=0.311)；p-P70S6K高表达组和低表达组患者5年总生存率分别为49％和69％，两组间总生存率差异显著(p=0.049)；p-4EBP1高表达组和低表达组患者5年总生存率分别为49％和71％，两组间总生存率差异显著(p=0.010)。　　 多因素Cox回归模型分析结果显示LMP1、性别和远处转移三者是鼻咽癌独立的预后因子。　　 结论：　　 1.鼻咽癌中LMP1能正向调控mTOR信号通路，通过逐步激活　　 AKT/mTOR/P70S6K/4EBP1，最终上调下游分子p-P70S6K和p-4EBP1的表达，促使蛋白翻译，细胞生长增殖。　　 2.鼻咽癌组织中LMP1、p-P70S6K和p-4EBP1能够作为判断患者预后的指标，其表达水平越高，预后越差。　　 3.鼻咽癌组织中LMP1、性别和远处转移三者能够作为独立的预后判断指标。