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目的我们在前期的实验发现中发现并证实Lumican在胃癌组织及细胞中表达高于正常组织及细胞,且Integrin alpha 5（整合素5）与胃癌的发生与发展有重要关系。本实验旨在进一步探索在干预lumican基因表达后对胃癌AGS和HGC-27细胞株生物学行为的影响及其涉及的机制和Integrin alpha 5调控关系。方法我们通过GEPIA2软件对肿瘤基因组图谱项目数据库中的胃癌组织标本和正常胃组织的m RNA表达数据进行分析,确定lumican在癌组织及正常组织的表达差异,同时对其进行生曲线分析,然后我们对收集来的10对胃癌组织与癌旁组织进行荧光定量PCR分析。在前期的实验中筛选出了最有效的lumican-si RNA,与此同时我们选择lumican过表达质粒对胃癌AGS和HGC-27进行干预,且在转染24-48小时时干预lumican的效果最佳,因此选择此si RNA和过表达质粒对胃癌AGS和HGC-27细胞进行实验。利用LipofectamineTM3000形成的脂质体将lumican-si RNA和lumican过表达质粒瞬时转染胃癌AGS和HGC-27细胞。转染24小时后,用CCK-8法和EDU分别检测抑制和加强lumican表达后细胞增殖情况;用Transwell及人工基质胶检测细胞迁移和侵袭能力的变化;用Annexin V-PE和7-AAD双染进行流式细胞技术检测,观测2株细胞不同处理组的凋亡变化情况;免疫荧光检测并确认lumican在2株细胞的表达部位;Western blot检测粘着斑激酶FAK、磷酸化粘着斑激酶p-FAK和整合素5（Integrin alpha 5）表达情况。最后我们用Western blot和q PCR分别检测在前期实验中对整合素5（Integrin alpha 5）进行干预的胃癌稳转株AGS和MKN-28细胞的lumican表达情况。结果1.数据库和10对组织样本PCR验证结果:在肿瘤基因组图谱项目数据库中的408例胃癌组织样本和211例正常组织样本中,lumican表达在胃癌组织中明显富集（P＜0.05）,在生存分析中低lumican表达组的生存时间较高表达组明显延长（P＜0.05）;收集的组织样本PCR结果提示lumican在胃癌组织中表达显著高于正常胃组织（P＜0.05）。2.CCK-8检测细胞增殖的结果:lumican-si RNA转染组的胃癌AGS细胞和HGC-27细胞在各个时间点（24小时、48小时和72小时）的增值率均低于阴性对照组（P＜0.05）;而lumican过表达组的胃癌AGS和HGC-27细胞在各个时间点（24小时、48小时和72小时）的增值率均显著高于阴性对照组（P＜0.05）。3.EDU检测细胞增殖的结果:转染48小时后,在lumican-si RNA转染组中胃癌AGS细胞和HGC-27细胞的新生细胞增殖率明显低于阴性对照组（P＜0.05）;在过表达组中,2株细胞的新生细胞增殖率则显著高于阴性对照组（P＜0.05）。4.Transwell检测细胞迁移的结果:转染48小时后,在lumican-si RNA组中胃癌AGS细胞和HGC-27细胞发生迁移的细胞数量显著低于相应的阴性对照组（P＜0.05）,与阴性对照组相比迁移抑制率AGS细胞为53.90%,HGC-27细胞为52.54%;在过表达组中,此2株细胞发生迁移的细胞数量明显高于对应的阴性对照组（P＜0.05）,与对应的阴性对照组比较迁移抑制率AGS细胞为-62%,HGC-27细胞为-108%。5.Transwell检测细胞侵袭的结果:在转染48小时后相比于阴性对照组,AGS细胞和HGC-27细胞中lumican-si RNA组侵袭穿越基质胶的细胞数显著下降（P＜0.05）,AGS细胞的侵袭抑制率为49.60%,HGC-27细胞的侵袭抑制率为44.70%;在过表达组中,AGS细胞和HGC-27细胞侵袭的细胞数量明显增多（P＜0.05）,2株细胞的侵袭率分别为-115.31%和-132.33%。6.流式细胞术检测细胞凋亡结果:胃癌AGS细胞和HGC-27细胞在转染48小时后,lumican-si RNA组的凋亡率相较于其阴性对照组无显著差异（P＞0.05）;同样在2株细胞的过表达组中,凋亡率相比于阴性对照组无明显差异（P＞0.05）。7.免疫荧光结果:DAPI染核提示胃癌AGS细胞和HGC-27细胞的状态良好,符合实验要求,lumican在细胞膜上大量表达。8.Western blot结果:相较于各对照组,胃癌AGS细胞和HGC-27细胞中lumican-si RNA组的FAK蛋白表达无明显变化,p-FAK蛋白表达均显著降低（P＜0.05）,而Integrin alpha 5蛋白表达无明显差异;胃癌AGS和HGC-27细胞中过表达lumican组的FAK蛋白表达无明显变化,p-FAK蛋白表达均明显升高（P＜0.05）,而Integrin alpha 5蛋白表达无明显差异。在抑制Integrin alpha 5蛋白表达的胃癌AGS和MKN-28细胞中,lumican表达也显著降低（P＜0.05）;在加强Integrin alpha 5蛋白表达的胃癌AGS和MKN-28细胞中,lumican表达显著增强（P＜0.05）。9.荧光定量PCR结果:相较于对照组,在干预胃癌AGS和HGC-27细胞中Integrin alpha 5表达后lumican的m RNA表达无显著变化（P＞0.05）。结论1.Lumican在胃癌组织中高表达,且其表达的高低与胃癌患者的生存率相关。2.干扰lumican表达可相应的使得胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力发生改变;但与胃癌细胞的凋亡无关。3.lumican通过FAK/p-FAK通路发挥其生物学功能,Integrin alpha 5可能通过影响膜蛋白lumican的蛋白表达发挥其生物学功能。