论文部分内容阅读
目的:1.检测人工流产组和稽留流产组绒毛组织中miR-362-3p及其靶基因MCAM mRNA,miR-361-3p及其靶基因FSTL3 mRNA、SCARB1 mRNA和ITGA5 mRNA的表达情况,研究其与稽留流产的相关性;2.检测MCAM和CD34基因在人工流产组和稽留流产组绒毛组织中蛋白表达情况,研究MCAM对孕早期绒毛微血管形成的影响;3.通过分析比较绒毛组织中miR-362-3p和MCAM mRNA相对表达量的相关性,MCAM和CD34基因蛋白表达量的相关性,初步探索miR-362-3p在妊娠早期稽留流产发生过程中的作用机制。方法:1.生物信息学分析:从课题组前期胚胎停育全转录组测序数据中选择表达上调明显的基因miR-362-3p和miR-361-3p进行分析研究,寻找相关对应的靶基因。关于miR-362-3p靶基因预测,我们应用Target Scan、ENCORI、micro T-CDS和miRDB四个在线网站预测其靶基因,使用Venn在线网站取交集;选取我们课题组前期全转录组测序数据中与血管生成相关且下调的mRNA,与前四种数据库结果交集再取交集,最终确定miR-362-3p与血管生成相关的靶基因MCAM mRNA;再运用Target Scan在线网站预测miR-362-3p和MCAM的结合位点。关于miR-361-3p靶基因预测,我们应用Target Scan和ENCORI两个miRNA靶基因预测网站其靶基因,再与我们课题组前期研究的全转录组测序中与血管生成相关且下调的mRNA通过Venn在线工具获得交集靶基因,结合查阅文献,选定靶基因FSTL3 mRNA、SCARB1 mRNA和ITGA5 mRNA。2.应用实时荧光定量聚合酶链反应,分别检测人工流产组30例患者和稽留流产组30例患者绒毛组织中miR-362-3p、miR-361-3p、MCAM mRNA、FSTL3 mRNA、SCARB1 mRNA和ITGA5 mRNA基因的表达情况,分析其与稽留流产的相关性。3.应用免疫组织化学法,分别检测人工流产组20例和稽留流产组20例绒毛组织中MCAM和CD34基因的蛋白表达情况,了解绒毛微血管密度的表达情况。4.统计学分析方法:采用SPSS23.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(`c±s)表示,采用独立样本t检验分析进行比较。运用Pearson相关分析统计miR-362-3p和MCAM mRNA相对表达量的相关性、MCAM和CD34基因蛋白表达量的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.生物信息学分析得出,对于miR-362-3p,我们分别应用Target Scan、ENCORI、micro T-CDS和miRDB四个miRNA靶基因预测网站预测其靶基因结果分别为359个、3502个、1643个、159个,使用Venn在线工具获得交集靶基因共35个,再与我们课题组前期研究的全转录组测序中与血管生成相关且下调的25个mRNA取交集,得到1个靶基因MCAM;对于miR-361-3p,我们分别Target Scan和ENCORI两个miRNA靶基因预测网站预测其靶基因结果分别为5181个和2973个,再与我们课题组前期研究的全转录组测序中与血管生成相关且下调的25个mRNA通过Venn在线工具获得交集4个靶基因,结合查阅文献,选定与血管生成相关的基因ITGA5进行验证;miR-361-3p通过Target Scan7.2和ENCORI两个在线网站预测的靶基因中,通过查阅文献及课题组前期研究,选定SCARB1和FSTL3进行后续qRT-PCR验证。2.qRT-PCR检测结果显示,稽留流产组绒毛组织中miR-362-3p和miR-361-3p表达水平升高,差异具有统计学意义,P<0.05;MCAM mRNA表达水平降低,差异具有统计学意义,P<0.05;FSTL3 mRNA表达水平降低,差异没有统计学意义,P>0.05;SCARB1 mRNA表达水平升高,差异具有统计学意义,P<0.05;ITGA5 mRNA表达水平升高,差异没有统计学意义,P>0.05。3.IHC检测结果显示,MCAM蛋白主要定位于内皮细胞胞质和细胞间连接处,MCAM蛋白阳性染色呈淡黄色或棕黄色,稽留流产组绒毛组织中MCAM蛋白表达量与人工流产组相比表达水平降低,差异具有统计学意义,P<0.05;CD34定位表达在血管内皮细胞的细胞质,CD34阳性染色呈淡黄色或棕黄色,稽留流产组绒毛组织中CD34蛋白表达量与人工流产组相比表达水平降低,差异具有统计学意义,P<0.05。4.Pearson相关分析结果显示,稽留流产绒毛组织中miR-362-3p相对表达量与MCAM mRNA相对表达量呈负相关,P<0.05;MCAM蛋白表达量与微血管密度呈正相关,P<0.05。结论:1.miR-361-3p在稽留流产绒毛组织中的表达上调且差异具有统计学意义(P<0.05),与稽留流产的发生发展相关。2.miR-361-3p的靶基因SCARB1mRNA在稽留流产绒毛组织中的表达上调且差异具有统计学意义(P<0.05),miR-361-3p可能作为增强子触发器或其他旁路调控SCARB1mRNA,从而与稽留流产的发病相关。3.miR-362-3p在稽留流产绒毛组织中的表达上调且差异具有统计学意义(P<0.05),与稽留流产的发生发展相关。4.miR-362-3p的靶基因MCAM mRNA在稽留流产绒毛组织中的表达下调且差异具有统计学意义(P<0.05),miR-362-3p与MCAM mRNA的相对表达量负相关,MCAM蛋白表达量与MVD正相关,miR-362-3p可能通过靶向MCAM干扰绒毛微血管形成进而参与妊娠早期稽留流产的发生机制。