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目的:探究子宫内膜癌HEC-1A细胞中细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）被短发夹RNA（shRNA）靶向沉默后,是否会对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和凋亡能力有影响;并通过体内动物实验探讨CDCA5在裸鼠体内促进子宫内膜癌增殖的能力。方法:1、利用shRNA干扰技术构建含靶向沉默CDCA5基因的序列的CDCA5-shRNA慢病毒颗粒,并转染至子宫内膜癌HEC-1A细胞。2、将HEC-1A细胞分为:实验组（CDCA5-shRNA group）:转染CDCA5-shRNA慢病毒颗粒的细胞;阴性对照组（Negative Control group）:转染含阴性对照shRNA序列的慢病毒颗粒的细胞;空白对照组（Blank Control group）:未经处理的细胞以上三组。取对数生长期的细胞进行转染。3、用荧光显微镜观察荧光标记的慢病毒在转染后可见绿色荧光蛋白（GFP）在细胞中的表达,荧光率即阳性转染率,并对转染后的细胞应用嘌呤霉素筛选稳定表达的HEC-1A细胞株。4、采用实时荧光定量核酸扩增技术检测（q PCR）检测转染慢病毒颗粒前后上述各组HEC-1A细胞中CDCA5的表达水平。5、运用蛋白印迹实验（Western Blotting）实验检测转染慢病毒载体前后上述各组HEC-1A细胞中CDCA5蛋白的表达水平。6、应用CCK8法检测转染24、48、72、96、120h后各组细胞的增殖能力;7、运用Annexin V-APC单染法流式细胞术检测转染慢病毒颗粒48h后的实验组和阴性对照组细胞凋亡情况。8、应用Transwell小室迁移、侵袭实验检测沉默CDCA5基因前后对上述各组HEC-1A细胞迁移、侵袭能力的影响。9、使用上述各组HEC-1A细胞在裸鼠体内构建子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,并记录裸鼠移植瘤的生长情况以绘制裸鼠移植瘤的生长曲线。10、使用免疫组化和Western Blotting实验检测切除下的各组子宫内膜癌棵鼠移植瘤,以探究沉默CDCA5基因前后移植瘤组织中CDCA5蛋白的表达水平的变化。结果:1、各组细胞转染慢病毒颗粒72h后,在荧光显微镜下观察到阳性转染率超过80%,并使用浓度为1μg/m L的嘌呤霉素筛选出了传代培养后阳性转染率没有发现明显变化,能稳定沉默CDCA5基因HEC-1A细胞。2、qPCR法检测各组HEC-1A细胞CDCA5 m RNA的表达情况:结果显转染shCDCA5后,HEC-1A细胞中CDCA5 m RNA的相对表达量（0.492±0.055）与阴性对照组（1.040±0.163）和空白对照组（1.00±0.090）相比较得到明显下调（P＜0.05）,而后两组无显著差异（P＞0.05）。3、Western Blotting法检测各组HEC-1A细胞CDCA5蛋白的表达情况:结果显转染shCDCA5后,CDCA5蛋白在实验组的表达较阴性对照组和空白对照组均明显下调（P＜0.05）,后两组CDCA5蛋白表达有差异,可能与慢病毒颗粒转染至细胞后蛋白表达受到影响有关。4、CCK-8法检测结果显示,CDCA5-shRNA实验组培养24、48、72、96、108h的相对增值率值均低于同一时间的阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,而后两组无显著性差异（P＞0.05）。5、流式细胞仪检测CDCA5-shRNA实验组凋亡能力相较于阴性对照组下降（P＜0.05）。CDCA5-shRNA组、阴性对照组总体凋亡率分别为（5.09+0.19）、（2.30+0.18）,CDCA5-shRNA实验组的总体凋亡率高于阴性对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6、在显微镜下观察Transwell小室迁移实验的结果显示,CDCA5-shRNA组穿过膜的细胞数目为（51±7）个,明显少于阴性对照组（96±9）个和空白对照组（112±12）个（P＜0.05）;而空白对照组相较与阴性对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）;Transwell小室侵袭实验的结果显示,CDCA5-shRNA组穿过膜的细胞数目为（58±7）个,明显少于阴性对照组（101±9）个和空白对照组（105±12）个（P＜0.05）;而其余两组相比较,差异未见统计学意义（P＞0.05）。7、在皮下接种各组细胞后移植瘤模型得到成功构建。与其他两组相比较,移植瘤生长曲线结果显示实验组裸鼠移植瘤生长更缓慢且体积更小,差异具有统计学意义（P＜0.05）,而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。8、用Western blot实验检测CDCA5-shRNA实验组、空白对照组、阴性对照组裸鼠皮下移植瘤组织中CDCA5蛋白的表达结果示:CDCA5蛋白的相对表达水平分别为:0.121±0.043、0.796±0.230、0.870±0.082。相较于其他两组CDCA5-shRNA实验组移植瘤组织中CDCA5蛋白的表达均较低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。空白对照组与阴性对照组的CDCA5蛋白的表达比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。9、用免疫组化法检测裸鼠皮下移植瘤组织结果示:CDCA5在实验组移植瘤组、阴性对照组及空白对照组中的阳性表达率分别为34.16±5.84%、61.67±14.75%和68.83±11.17%。实验组CDCA5的阳性率明显低其他两组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。空白对照组与阴性对照组的CDCA5阳性率比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:运用shRNA干扰技术下调CDCA5基因表达可以抑制HEC-1A细胞增殖,降低细胞的迁移能力和侵袭能力,促进细胞凋亡,且能抑制裸鼠皮下子宫内膜癌移植瘤的生长。由此可得,CDCA5具有促进子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及抗凋亡能力。