水稻种子与人类生活息息相关,也是基因改良的重要目标材料,启动子作为水稻种子遗传改良工作中一个重要的分子工具,在基因转录起始过程中有高效调控功能,其中胚特异性启动子不仅决定了外源基因在特定组织、发育阶段的表达,还有效避免了外源基因在水稻其他器官或组织表达,造成能源消耗等不利影响。因此,了解胚特异性启动子在水稻种子中的表达特征及作用机制,鉴定并获得高效专一的种胚特异性启动子,有利于研究外源基因在水稻种胚中的表达,对于改良水稻品质有重要理论和实践意义。本实验筛选了三个胚特异性启动子OsESP1、p EMB1和Ole18,分别连接到含红色荧光蛋白（RFP）报告基因的载体p LJ02上构建双荧光融合表达载体。利用基因枪介导的瞬时表达结合农杆菌介导的稳定表达,通过荧光观察,鉴定三个胚特异启动子的特异表达模式,选出在水稻胚中特异性较好的启动子,将其应用到一系法杂交稻的创制中。主要结果如下:（1）从NCBI网站上获得OsESP1、pEMB1和Ole18启动子序列,构建含有GFP和RFP的融合表达载体p26P1、p26P2、p26P3。构建组成型启动子Ca MV 35S驱动e GFP表达的融合表达载体p26GR,作为e GFP阳性对照。交由公司构建,提取载体大肠杆菌质粒并进行验证,酶切片段大小符合预期,表明载体构建正确;将表达载体分别转入农杆菌感受态中,提取载体农杆菌质粒并酶切验证,片段大小符合预期,鉴定为阳性克隆菌液,可用于农杆菌侵染。（2）使用基因枪瞬时转化法,分别将p26GR、p26P1、p26P2、p26P3表达载体转化到水稻成熟胚中,每个载体转化三批成熟胚。将转化后获得的材料在荧光体式显微镜下观察,结果表明四个表达载体均已转入成熟胚中,但均未能驱动绿色荧光的表达;进一步进行基因枪转化实验,以水稻幼胚为受体材料转化四个表达载体,每个载体转化三批幼胚。在荧光体式显微镜下观察转化后的幼胚材料,实验结果表明启动子Ole18可驱动外源基因在水稻幼胚中表达。（3）将验证为阳性菌液的农杆菌通过农杆菌介导法转入水稻品种日本晴,p26GR、p26P1、p26P2、p26P3表达载体各获得18、23、26、20株T1代转化植株,取叶片进行PCR检测,结果表明部分表达载体已转入植株中,将确定为阳性克隆的植株移栽至大田培养直至收获T0代种子,观察表达载体的T0代种子各部分荧光表达情况,发现p26P1和p26P3种子胚部分有绿色荧光表达,结果表明Os ESP1和Ole18是专一的胚特异性启动子。（4）结合基因枪瞬时转化和农杆菌稳定转化的结果,选取表达高效且专一的胚特异性启动子Ole18,构建胚特异表达的红色荧光抑制表达盒E1,和花粉特异表达启动子驱动针对E1表达的调控表达盒E2和胚自主发生表达盒E3一同转入p24Mi Me合成p24DB,以此分选出无融合种子,实现水稻胚特异性启动子在一系法杂交稻创制中的应用。