Rce1在膀胱癌的表达及其对T24细胞周期和凋亡的影响

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目的:检测Rce1(Ras and a-factor converting enzyme 1)在膀胱肿瘤组织及对应肿瘤旁正常移行上皮组织中的动态改变及其临床意义;以慢病毒为载体,构建shRNA干扰序列沉默Rce1基因,观察Rce1低表达对人膀胱癌T24细胞凋亡百分比的影响和细胞周期分布的改变。方法:采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白印记杂交(western blot)技术,分别检测Rce1在12例膀胱肿瘤组织及对应肿瘤旁正常上皮组织中mRNA和蛋白表达差异;应用免疫组化技术,检测78例膀胱肿瘤组织,21例肿瘤旁正常上皮组织中Rce1的动态改变情况;结合病人的临床p TNM分期,细胞组织学分级等病理资料,分析Rce1的动态改变与病人临床特征,病理分型的关系。以慢病毒为载体,以Rce1为目的基因,设计shRNA-Rce1干扰序列,转染T24细胞,采用嘌呤霉素筛选,建立稳定低表达Rce1的T24细胞系;采用实时荧光定量PCR和western blot技术,分别检测各组T24细胞中Rce1在mRNA和蛋白的表达水平;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM),检测各组T24细胞在细胞周期的分布情况,细胞凋亡率所占百分比。结果:qRT-PCR和western blot显示,在12对膀胱肿瘤及肿瘤旁正常上皮组织中Rce1存在表达量的动态改变,差异有统计学意义(P=0.00);78例肿瘤组织中,Rce1阳性表达率为70.5%(55/78),肿瘤旁正常上皮组织中,检测到Rce1表达的比例为19.0%(4/21),Rce1阳性表达在肿瘤及肿瘤旁正常上皮组织的百分比存在差异,统计学分析差别有意义(P=0.00);统计学分析提示,Rce1阳性表达率在肿瘤的细胞组织学分级的各个分级百分比存在差异,在pTNM分期中各T分期中阳性表达率也有差异,Rce1在存在肿瘤远处转移的病人中阳性表达百分比跟高(P<0.05);Kaplan-Meier分析不同病人的生存时间显示,与Rce1阴性病人相比,膀胱癌肿瘤中能够检测到Rce1表达的病人预后比较差(P=0.016)。与未感染病的空白对照组和感染病毒的阴性对照组相比,感染慢病毒干扰序列的T24细胞中Rce1在mRNA和蛋白表达水平明显下调(P=0.00),Rce1低表达T24细胞凋亡百分比增加,shRNA-Rce1组细胞在各周期的比例没有显著变化。结论:Rce 1在膀胱肿瘤组织中表达高于肿瘤旁正常上皮组织,Rce1可能参与了膀胱肿瘤的发生发展中;慢病毒干扰序列shRNA沉默Rce1基因能有效下调Rce1在T24细胞中表达,并诱导T24细胞凋亡;Rce1有望成为膀胱癌临床诊治和预后的一个新指标。
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