碘硒干预对自身免疫性甲状腺炎抗氧化及凋亡的影响

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目的研究微量元素碘和硒在自身免疫性甲状腺炎过程中对自身抗体水平及抗氧化能力的影响;探讨碘和硒对自身免疫性甲状腺炎过程中凋亡蛋白表达的影响;探索并检验一种简便高效的实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型的建立方法。方法1.将雌性Lewis大鼠随机分成两组,即对照组和模型组。对模型组进行甲状腺球蛋白免疫,免疫用量为0.8 mg pTg/只,每两周1次,共3次,第3次免疫完成后处死动物取材检测。检测自身抗体甲状腺球蛋白抗体(TGAb)及甲状腺微粒体抗体(TMAb)水平,观察甲状腺病理变化并对模型进行评价;2.对实验性自身免疫性甲状腺炎模型(EAT)大鼠给予不同水平的碘干预,具体是适碘饲料(0.90 mg I/kg),高碘饲料(18 mg I/kg),低碘饲料(<0.02 mg I/kg),饲养一段时间后检测其自身抗体、肝脏和脑组织抗氧化能力及甲状腺凋亡蛋白的变化;3.先对大鼠实施不同剂量的硒干预2周,然后免疫建立EAT模型,其中硒干预剂量设置分别是适硒组喂饲普通饲料(含Se 0.20 mg/kg),高硒组喂饲高硒饲料(含Se 2.00 mg/kg),低硒组喂饲低硒饲料(含Se 0.02 mg/kg),每日硒摄入量约为:适硒组4μg,高硒组40μg,低硒组0.4μg,观察自身抗体、抗氧化能力及凋亡蛋白的变化;4.对EAT大鼠同时施加不同剂量的碘和硒干预,具体是将实验大鼠随机分成6组,分别为造模+高碘补硒组(M+I+se+组)、造模+高碘适硒组(M+I+Se组)、造模+高碘低硒组(M+I+Se-组)、造模+低碘补硒组(M+I-Se+组)、造模+低碘适硒组(M+I-Se组)、造模+低碘低硒组(M+I-Se-组),其中碘和硒的剂量分别为高碘(I+,18 mg I/kg),低碘(I-,<0.02 mg I/kg),硒剂量分组分别为适硒(Se,含Se 0.20 mg/kg),高硒(Se+,含Se 2.00 mg/kg),低硒(Se-,含Se 0.02 mg/kg),观察其自身抗体、肝脏和脑组织抗氧化能力及甲状腺凋亡蛋白的变化情况,分析其中的主效应及交互作用。结果1.免疫完成后试验大鼠甲状腺出现明显的病理改变,自身抗体TGAb及TMAb水平明显升高,EAT模型建立成功,成模率达到100%;2.不同碘摄入状态下自身抗体仍然处于较高水平,无明显变化(F1=0.716,P=0.501;F2=0.716,P=0.501),适碘(M)及高碘(M+I+)时大鼠肝脏SOD及GPx活性均显著高于低碘(M+I-)组(F1=20.82,P=0.000;F2=4.05,P=0.035),高碘组肝脏GPx和SOD活性较适碘组均呈现出下降趋势,但差异未发现有统计学意义,适碘组及低碘组大鼠脑组织GPx活性均显著高于高碘组(F=10.82,P<0.001),而在不同碘水平下脑组织中SOD活性变化不明显,M+I+组及M+I-组大鼠FasL、Bcl-2蛋白表达量均显著高于M组,且M+I-组大鼠FasL蛋白显著高于M+I+组(F1=l14.78, P1=0.000; F2=5.67, P2=0.006)。M+I-组大鼠TRAIL表达量显著高于M组(F=55.45,P=0.000),Capase-3表达量显著高于M+I+组(F=16.46,P=0.000);3.不同硒摄入时自身抗体TGAb、TMAb水平差异无统计学意义,但自身抗体水平有随补硒剂量增高呈现下降的趋势,各组间大鼠GPx活性差别有统计学意义(P<0.05),与适硒组(M)相比,补硒组(Se++M)活性明显升高,而低硒组(Se-+M)GPx活性显著下降,(P<0.05),其中Se++M组GPx活性最高,Se-+M组与其余两实验组相比,GPx活性明显降低(P<0.05),各组大鼠肝组织SOD活性差异不明显;4.硒碘干预组析因分析显示硒碘联合对自身抗体没有交互作用,在对肝脏SOD活性的影响中主要以碘的效应为主(F=47.26,P=0.000),在对肝脏GPx活性影响中,碘、硒均有作用,补硒可升高肝脏GPx活性(F=9.26,P=0.000)。脑中SOD活性未见碘、硒有明显作用,而脑GPx活性同样均受到碘、硒的影响,析因分析表明碘和硒可影响Fas,Bax的表达,碘还可影响FasL的表达,而Bcl-2的表达以硒为主效应,对TRAIL、Capase-3的表达,硒碘存在交互作用。结论1.本研究采用异种Tg作为免疫原建立EAT模型的方法可靠、快速、易于实行;2.碘过量及碘缺乏均可加剧EAT大鼠甲状腺细胞凋亡,促进EAT的病理改变,引起机体抗氧化能力降低,但尤以碘缺乏时严重;3.适量补硒可降低体内自身抗体TGAb和TMAb的滴度,明显提高GPx活性,增强了机体对抗炎症过程中氧化损伤的能力,充足的硒摄入对凋亡蛋白的表达具有一定的调节作用;5.不论是碘缺乏还是碘过量,补硒均可明显增强抗氧化能力,这种作用在碘过量时更为突出,硒对凋亡相关蛋白作用不尽相同,在剂量适宜的情况下补硒可以降低凋亡发生的危险。
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