胃癌细胞核酸适体的筛选和鉴定

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研究目的:核酸适体是能够特异性结合靶细胞及相关分子的单链寡核苷酸片段,不仅有分子识别功能,还可能有信号转导和调节功能,已被作为分子识别工具和治疗药物的载体用于多种疾病的诊断和治疗,其在胃癌诊断和治疗中的意义未见研究报道。本研究通过细胞-SELEX技术筛选胃癌细胞特异性核酸适体,并对其特异性和敏感性进行初步鉴定,为建立以核酸适体为基础的胃癌诊疗技术奠定基础。   研究方法:(1)设计合成随机单链DNA文库;(2)以人胃癌细胞为靶标、以人正常胃上皮细胞为参照,采用消减细胞SELEX技术,从随机单链DNA文库中筛选胃癌细胞结合核酸适体;(3)对筛选所得核酸适体进行克隆、测序和二级结构分析;(4)将二级结构各异的适体进行合成并标记FITC荧光基团,分别与胃癌细胞、正常胃上皮细胞、肝癌细胞及结肠癌细胞结合,流式细胞仪分析其识别和结合胃癌细胞的特异性和敏感性。   结果:(1)经过1-7轮筛选,每轮次级文库与胃癌细胞结合率逐渐升高,于第7轮时达到平台区(69.16%);(2)经克隆测序鉴定出30条长度和两端固定序列区序列符合设计要求、中间随机序列区序列各异的胃癌适体,分别命名为cy-apt1-30;(3)二级结构分析显示30条胃癌适体多为茎环、发夹及两者组合体样结构;(4)流式细胞仪分析示cy-apt1-30-FITC结合胃癌细胞的率高于其他细胞,其中cy-apt2、cy-apt8、cy-apt19和cy-apt20识别和结合胃癌细胞的特异性和敏感性较强,分别为60.7%、63.6%、61.9%、67.7%。   结论:通过消减细胞SELEX技术所筛选出的胃癌结合核酸适体,能够识别和结合胃癌细胞,具有较强的特异性和敏感性,有望作为分子识别工具和治疗药物的载体,用于胃癌的诊断和治疗。
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