玉米干旱胁迫相关基因突变体的分子鉴定及抗旱性评价

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hoko0428001
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本研究前期从玉米Mu突变体库中筛选干旱胁迫差异表达基因的插入突变体,获得其中19个基因的候选突变体。在此基础上,在大田种植这些候选突变体的后代,并继续进行分子鉴定,保留阳性植株,对其自交或与B73回交,以期获得背景较为一致的纯合突变体材料进行表型鉴定。通过PCR鉴定,保留阳性植株,在大田对其自交,与B73回交,到目前为止,获得了BC1F3、BC2F2或BC3F1代,共17个目的基因,43个插入株系的可遗传Mu转座子插入突变体;通过对突变体材料的基因型检测,获得了6个基因的Mu插入纯合突变体,其中5个为BC1F3代,1个为BC1F4代;对19个目的基因,共63个插入位点的候选突变体材料的PCR产物测序,确定了Mu插入的具体位置:28个Mu插入位点定位在目的基因的5’非翻译区,17个在内含子区,6个在外显子区,12个插入在非目的基因序列当中。在获得Mu插入纯合突变体的基础上,对M9-2G4和M25-37811进行了干旱胁迫处理,并检测了基因M9,M25在B73以及突变体中的表达情况。在正常浇水条件下,突变体M9同B73相比,表型没有明显差别,而在干旱胁迫条件下,突变体M9的存活率以及叶片保水能力低于B73,表现出对水分更敏感;M9基因的表达检测表明,该基因在突变体和B73中都有表达,不过在突变体中表达相对较弱。同样的,突变体M25在水分胁迫条件下,同B73相比,叶片枯黄程度较重,表现出对水分更敏感,不耐旱;M25基因的表达检测表明,该基因在突变体中没有表达。通过RT-PCR方法,克隆了4个玉米蛋白磷酸酶基因。将这4个基因构建了用35S启动子驱动的植物超表达载体,并转化了野生型的拟南芥。通过PPT筛选,获得了M25转基因纯合株系19个。M25转基因纯合株系的ABA, NaCl,甘露醇胁迫处理表明,转基因株系与WT的表型没有明显差异。
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