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在本课题组前期成功建立的术后疲劳综合征大鼠模型中,观察到大鼠在腹部大手术后恢复期三个脑区5-HT的含量呈现规律性变化。因此,本实验希望以此为研究切入点,继续尝试从中枢角度揭示术后疲劳综合征的发生机制,通过验证术后疲劳综合征的大鼠模型和评估体系,观察脑海马区域5-HT在术后恢复期的变化规律和检测5-HT及其旁路中的关键酶活性,研究5-HT及其旁路在术后疲劳综合征中的作用机制并为术后疲劳综合征的临床诊治提供理论依据。
一、术后疲劳综合征大鼠模型及评估体系的验证
材料和方法:本实验以SD大鼠为实验动物,共20只,按体重大小编号后随机分为模型组(n=10)和对照组(n=10)。模型组行70%中段小肠切除端端吻合术,对照组仅行开关腹手术。根据大鼠的一般情况(体重变化,眯眼情况,毛发情况,自我洁净能力)、行为学实验(Morris水迷宫)综合判断术后疲劳综合征的发生。
结果:与对照组相比,模型组大鼠术后体重增长缓慢,且均低于对照组,眯眼,毛发无光泽,自我清洁能力差,随着术后时间的延长逐渐好转。与对照组相比,模型组隐藏平台获得试验逃避潜伏期明显增加,空间搜索试验在目标象限的游泳时间明显缩短,穿越目标次数明显减少。
结论:模型组大鼠术后一般情况,学习能力和记忆保持能力与前期建立的术后疲劳综合征大鼠模型相符合,一致性好,进一步提示术后疲劳综合征大鼠模型重复性强。
二、5-HT及其旁路在术后疲劳综合征中的作用机制
材料和方法:本实验以SD大鼠为实验动物,共64只,按体重大小编号后随机分为模型组(n=32)和对照组(n=32)。模型组分为术后1天组(n=8),术后3天组(n=8),术后7天组(n=8),术后10天组(n=8);对照组分为术后1天组(n=8),术后3天组(n=8),术后7天组(n=8),术后10天组(n=8)。模型组行70%中段小肠切除端端吻合术,对照组仅行开关腹手术。分别于术后(1、3、7、10)天取脑组织,采用高效液相色谱-串联质谱法测定脑海马组织中5-HT的含量,荧光定量PCR法检测脑海马组织中TPH1、TPH2、IDO、NMDA受体的表达量。
结果:与对照组相比,模型组大鼠脑海马组织5-HT的含量分别于术后1天、术后3天明显升高,在模型组大鼠中,术后1天、术后3天脑海马组织5-HT的含量均较术后7天,术后10天明显升高,术后3天升至最高,术后7天、术后10天逐渐恢复正常。与对照组相比,模型组大鼠脑海马组织TPH1表达量于术后3天明显升高,在模型组大鼠中,术后3天脑海马组织TPH1表达量较术后1天,术后7天,术后10天均明显升高。与对照组相比,模型组大鼠脑海马组织TPH2表达量分别于术后1天、术后3天明显升高,在模型组大鼠中,术后1天、术后3天脑海马组织TPH2表达量均较术后7天,术后10天明显升高,术后3天升至最高,术后7天、术后10天逐渐恢复正常。与对照组相比,模型组大鼠脑海马组织IDO表达量于术后1天明显升高,在模型组大鼠中,术后1天脑海马组织IDO表达量较术后3天,术后7天,术后10天均明显升高。与对照组相比,模型组脑海马组织NMDA受体表达量于术后1天明显升高,在模型组大鼠中,术后1天脑海马组织NMDA受体表达量较术后3天,术后7天,术后10天均明显升高。
结论:在术后疲劳综合征大鼠模型中,脑海马区域5-HT含量术后早期明显升高,其升高与5-HT限速酶TPH1、TPH2的表达量上调有关,同时5-HT旁路关键酶IDO表达量的上调与其下游的NMDA受体表达量上调相一致,提示5-HT旁路可能在术后疲劳综合征中亦起相当重要的作用。