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目的：
1.首先利用分子生物学技术构建真核表达载体pEGFP-N1-HBe(385-420)-ecdCD40L，应用生物信息学初步分析融合蛋白设计的合理性。
2.建立从人外周血分离培养树突状细胞的方法，通过对DC的形态学观察及免疫表型等的检测进一步探讨HBe(385-420)-ecdCD40L融合基因修饰对树突状细胞(DC)功能的影响。
方法：
1.利用RT-PCR法扩增ecdCD40L基因片段，用重叠PCR法构建HBe(385-420)-ecdCD40L融合基因，进而构建重组质粒pEGFP-N1-HBe(385-420)-ecdCD40L，并通过酶切和测序分析鉴定，将鉴定符合实验条件的质粒进行大量制备。
2.利用生物信息学软件对拟构建的融合蛋白的理化性质和二级结构特征进行初步分析预测。
3.本研究首先在无菌条件下采集健康人外周血，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，本实验利用贴壁法培养，培养前7天加入含rhGM-CSF(100ng/ml)、rhIL-4(50ng/ml)的完全培养基，7天后加入rhTNF-α(25ng/ml)诱导成熟的树突状细胞，用倒置显微镜、透射电子显微镜观察第3、5、7、9天树突状细胞的形态变化。收取培养至第5天的树突状，用Lipofectamine TM2000Reagent将构建成功的重组质粒转染入收集的DC内，用荧光显微镜检测转染效率，流式细胞仪检测转染后的DC表面CD80、CD86、HLA-DR的表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子IL-12p70的分泌水平及其CCK-8法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。
结果：
1.成功的构建真核表达载体pEGFP-N1-HBe(385-420)-ecdCD40L，并且通过酶切和测序证明。并且利用生物信息学软件预测融合蛋白的理化性质和二级结构未发生改变。
2.利用密度梯度离心法分离的健康成人外周血单个核细胞，经细胞因子的联合诱导成功培养出具有典型形态特征的树突状细胞，并且树突状细胞随着时间发生明显的形态学及数量上的改变;且融合基因HBe(385-420)-ecdCD40L修饰的DC能够高表达共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR、分泌大量的IL-12p70以及刺激T淋巴细胞增殖的能力增强。
结论：
1.成功构建pEGFP-N1-HBe(385-420)-ecdCD40L真核表达载体，并且生物信息学软件分析得知重组体设计合理。
2.EcdCD40L能与DC细胞表面的CD40相互作用，促进DC的成熟，增强DC功能，且CD40L能够增强HBe(385-420)的免疫原性，因此，将CD40L胞外段基因与HBV抗原基因融合可以增强HBV DNA疫苗的免疫效果。