以银杏叶为试材，研究叶黄酮生物合成关键酶---苯丙氨酸解氨酶（PAL）的特性及主要影响因子，并开展了提高银杏叶黄酮含量试验。主要结果如下： 1、分离纯化及基本性质 经过一系列的分离纯化，蛋白质得率为0.35，酶的得率为1.17，纯化倍数为3.32。PAL在硼酸缓冲液中最适pH是8.8，在Tris-HCl缓冲液中最适pH为：pH8.0、pH8.8。用pH10和pH4 Tris-HCl处理，5 min后，PAL活性分别残存13.07％，45.64％。PAL最适反应温度为50℃，该酶较耐高温：40℃，50℃水浴30 min，60℃，70℃，80℃水浴20min，90℃水浴10 min，100℃水浴5 min时，酶活性还残存50％左右。酶液酶活性残存50％左右时，贮存时间长短依次为：-20℃甘油贮存液：37d、-20℃40％（NH₄）₂SO₄悬浮液：21d、-20℃上清液：15d、4℃甘油贮存液：21 d、4℃上清液：5 d、4℃ 40％（NH₄）₂SO₄悬浮液：3d。PAL最适底物浓度为0.02mol／L，其Km为8.568×10^-3mol／L。 2、金属离子对酶活性的影响 重金属BaCl₂、SrCl₂、Co（NO₃）₂都能不同程度地抑制酶活性，而4 mmol／LAgNO₃能够增加酶活性，其余轻微地抑制酶活性；活性中心常见金属离子FeSO₄、CuSO₄、Zn（Ac）₂、MnSO₄和ZnSO₄能大幅度地促进酶活性，最佳促进效果为：FeSO₄＞CuSO₄＞Zn（AC）₂＞MnSO₄>ZnsO₄，最佳处理浓度为FeSO₄ 4mmol／L，CuSO₄ 4mmol／L，Zn（AC）₂ 0.05mmol／L，ZnSO₄ 4mmol／L，MnSO₄ 2mmol／L。不同浓度的Al₂（SO₄）₃、CaCl₂、MgCl₂对酶活性的影响效果不明显。4 mmol／L，0.5 mmol／L EDTA抑制酶活性，2 mmol／L，1 mmol／L EDTA促进酶活性，4 mmol／L，0.5 mmol／L KHB₄轻微促进酶活性，2 mmol／L，1 mmol／L KHB₄强烈抑制酶活性。 3、光及机械损伤对酶活性的影响 室温下，PAL活性在黑暗条件下缓慢降低；红光，白光以及机械损伤均能使PAL活性升高，在红光、白光下，PAL活性呈周期性变化，其周期约为24h，其中白光的作用效果优于红光。机械损伤使PAL活性快速上升后急剧下降，最后再缓慢下降，没有表现节律性。低温下的光照试验结果与室温下的相同。 4、生长调节剂对离体叶片酶活性的影响 各种措施的诱导效果为：ETH＞2，4-D＞IAA＞ABA＞GA₃。ETH处理都不同程度的诱导酶活性，其中300 mg／LETH诱导作用最强；CCC处理均能诱导酶活性上升，但随着其浓度的升高，诱导能力下降，200 mg／L诱导作用最强。ABA除了100 mg／L处理使酶活性略有降低外，其他三个浓度的ABA都能诱导酶活性升高，75 mg／L ABA诱导能力最强。IAA除了100 mg／L酶活性比CK低外，其它三个浓度都比CK酶活性要高，诱导作用最强的是70mg／L，且诱导全过程的酶活性都比CK高。2，4-D处理都能诱导酶活性，其中40 mg／L2，4-D诱导效果最强，40 mg／L 2，4-D处理有两个明显的诱导高峰。GA₃的四个浓度处理中仅75 mg／L能使酶活性比CK高。刘卫红:银杏叶苯丙氨酸解氨酶特性及其对叶黄酮含量调控的研究 5、底物、末端产物对离体叶片酶活性的影响 苯丙氨酸处理浓度高于2.5 Inlnol/’L时，抑制酶活性，从2.5 Inlnol/L开始促进酶活性，诱导活性最强的是1.25二。1/L。4个浓度的反式肉桂酸处理都能抑制酶活性，IOOmg毛反式肉桂酸抑制酶活性作用最大。3，5一DHCA除100 mg/L微弱地增加酶活性外，其余都抑制酶活性，抑制酶活性最强的为200 mg/L。阿魏酸除100 mg/L浓度增加酶活性外，其他浓度都降低酶活性，50 mg/L抑制酶活性最强。4个浓度的4，5，7一三轻黄烷酮（、aringenin）都能抑制酶活性，其中，6.25mg/L抑制能力最强，6.25 mg/L Naringenin抑制有3个高峰，分别出现在15 min，4h，12h。. 6、盆栽园和叶用园各处理对PAL活性及黄酮含量的影响 盆栽园和叶用园银杏苗CK中叶黄酮含量变化均有3个明显的峰，两个分别出现在8一03，11一03，另一个峰盆栽园出现在9一19，而叶用园出现在9一03。叶用园CK酶活性变化和黄酮变化同步，盆栽CK酶活性只有两个峰值，出现在8一03，10一03，和黄酮含量变化前期（10一3前）同步，后期（10一3后）不同步。 盆栽园:4种金属离子处理，酶活性以及黄酮含量均比cK大，0.1%、0.3%FeS认 （浓度I、浓度1 11），0.1%ZnSO4（浓度I）、0.1%、0.5%MnSO;（浓度I、浓度111），0.4%CuSO;（浓度HI），处理不仅提高叶黄酮含量，而且还延长了最佳采叶期。提高黄酮含量最佳浓度组合为0.2%ZnSO4，0.3%MnSO4，0.4%Cuso4，0.1%FeSO;，其黄酮含量（1 .6194%）远远大于其它处理。黄酮含量变化峰值和酶活性变化峰值不一致。 叶用园:ETH、CCC、2，4一D、IAA、GA3、SA、Phe各浓度处理黄酮最高含量多出现在8一03至9一03之间，最大酶活性多出现在9一。3至10一03之间。在l卜03，酶活性和黄酮含量增加量都最大的一致处理是:50m罗‘L ccc，70m乡L工AA，400 mgLETH浓度。ETH、ccc、2，4一。、工AA、GA3、S八、阶e各浓度处理酶活性增量和黄酮含量增量均有2个峰值:分别出现在阶旧至9一19间，和9一19至10一19间。酶活性在9一03都比CK大，但黄酮含量反而都比CK小，相差在0.2%以内。