海南五指山苏云金芽孢杆菌的分离与对小菜蛾高毒力菌株的筛选

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本研究系统的从海南岛五指山热带雨林区采集到433份土样,利用醋酸钠选择培养基的分离方法从中分离到1009株芽孢杆菌,其中产晶体的苏云金芽孢杆菌(简称Bt,下同)野生菌株30株,伴孢晶体类型有菱型、球型、方型、不规则型,体现了土壤中Bt菌株资源的多样性,出菌率为6.93%。SDS-PAGE电泳图谱显示,表达的杀虫晶体蛋白有130,120,90,80,50,40KDa,显示出杀虫晶体蛋白的的多样性。在对五指山热带雨林区Bt菌沿海拔分布规律分析发现五指山热带雨林区海拔1000米到1500米的土壤中Bt菌株出菌率比较高,低海拔与高海拔的地方Bt菌的出菌率都不高。   利用本实验室设计的50对与中国农科院设计的16对鉴定苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的通用引物,通过PCR-RFLP的方法对分离到的苏云金芽孢杆菌进行新的杀虫晶体蛋白基因的探寻。实验中对3个菌株筛选到的三个经PCR-RFLP分析具有多态性的PCR产物进行测序分析,结果表面这三条序列不是杀虫晶体蛋白基因的编码序列,由于非特异扩增,扩增到了苏云金芽孢杆菌基因组的序列中的序列,不是我们希望获取的杀虫晶体蛋白基因。   为了分离到有高毒力的菌株,以本实验室分离到的52株Bt野生菌株(其中30株为本实验分离,另外22株为实验室其他同学分离的菌株)为供试菌株,鳞翅目昆虫小菜蛾和鞘翅目昆虫黄粉虫为供试昆虫,进行生物测定。生物测定结果表明这52株对鞘翅目昆虫黄粉虫没有毒性,而对鳞翅目昆虫筛选到了8株高毒力的菌株,48小时校正致死率达90%,72小时校正致死率达100%。部分菌株的半致死率为W0015-1的为1.01×109 cfu/mL,S1884-1的为0.30×109cfu/mL,S2115-1的为1.04×109cfu/mL,S2125-1的为0.45×109cfu/mL,其中模式菌株HD-73测定的为2.43×109cfu/mL。
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