论文部分内容阅读
胃癌是全世界常见恶性肿瘤之一，也是我国死亡率最高的恶性肿瘤。胃癌的发生发展有着复杂的基因组学改变，如癌基因扩增和抑癌基因缺失等。双微体(Double minutes，DMs)是基因扩增的主要细胞遗传学标志，也是基因扩增的主要载体之一。课题组前期对文献报道建立的含双微体的胃癌细胞系NCI-N87进行染色体核型分析验证了双微体的存在；并对NCI-N87细胞进行芯片比较基因组杂交，发现染色体17q12-q21.31为扩增倍数最高区域；进一步通过NCBI数据库筛查此区域内的已知基因，选择扩增倍数最高的已知癌基因ERBB2及其周围共扩增的STARD3和PERLD1基因为目的基因：(1)确定胃癌中是否存在ERBB2、STARD3和PERLD1基因共扩增，其表达变化及其临床意义如何。(2)确定胃癌中ERBB2、STARD3和PERLD1基因与双微体的关系。 本课题采用Real-time PCR、Western blot、免疫组化方法分别从DNA、mRNA和蛋白质三个层面分析1个双微体(+)和4个双微体(-)胃癌细胞系及120例胃癌组织中ERBB2、STARD3和PERLD1基因的表达。 Real-time PCR和Western blot结果表明，与对照HEK293细胞相比，双微体(+)胃癌细胞NCI-N87中ERBB2、STARD3和PERLD1 DNA拷贝数明显增加(P<0.05)，双微体(-)胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MGC-803和HGC-27中ERBB2、STARD3和PERLD1 DNA拷贝数未见明显改变。双微体(+)胃癌细胞NCI-N87中ERBB2、STARD3和PERLD1mRNA水平明显增加(P<0.05)，双微体(-)胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MGC-803和HGC-27中ERBB2、STARD3和PERLD1mRNA水平无明显改变。双微体(+)胃癌细胞NCI-N87中，ERBB2蛋白表达明显增高(P<0.05)，双微体(-)胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MGC-803和HGC-27中其蛋白质表达无明显变化。 免疫组化结果表明，ERBB2、STARD3和PERLD1基因分别在肠型胃癌组织中呈特异性高表达。肠型胃癌中ERBB2表达(26/42，62％)明显高于弥漫型胃癌(17/72，24％)及其他类型胃癌(1/6，17％)(P<0.05)，癌组织中ERBB2蛋白表达(26/42，62％)显著高于相应癌旁组织(16/42，38％)(P<0.05)。肠型胃癌中STARD3表达(35/42，83％)明显高于弥漫型胃癌(25/72，34％)及其他类型胃癌(2/6，33％)(P<0.05)，癌组织中STARD3蛋白表达(35/42，83％)显著高于相应癌旁组织(22/42，52％)(P<0.05)。肠型胃癌中PERLD1蛋白表达(11/42，26％)显著高于弥漫型胃癌(1/72，1％)及其他类型胃癌(1/6，17％)(P<0.05)，癌组织中PERLD1蛋白表达(26％，11/42)显著高于相应癌旁对照组织(3/42，7％)(P<0.05)。 上述结果可结论：DNA检测证实胃癌细胞NCI-N87中ERBB2、STARD3和PERLD1基因拷贝数增高，提示胃癌中存在ERBB2、STARD3和PERLD1基因共扩增，可能与细胞内双微体有关。mRNA检测证实胃癌细胞NCI-N87中，ERBB2、STARD3和PERLD1转录子水平增强，提示胃癌中存在ERBB2、STARD3和PERLD1基因过表达。蛋白质检测证实胃癌细胞NCI-N87中ERBB2蛋白表达增强，提示胃癌中存在ERBB2基因过表达。免疫组化检测证实ERBB2、STARD3和PERLD1基因在肠型胃癌组织中存在特异高表达，提示ERBB2、STARD3和PERLD1这三个共扩增基因的过表达与临床胃癌病理分型有关。