【摘 要】
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黄秋葵（Abelmoschus esculentus L.）是我们日常生活中的一种常见蔬菜,并且含有大量的多糖。RPS-2是我们先前研究中从黄秋葵中分离出的三种多糖（RPS-1,RPS-2,RPS-3）之一,RPS-2在体内外均具有良好的免疫调节活性。RPS-2对RAW264.7细胞的免疫调节机制尚不清楚,本文旨在研究RPS-2是否通过TLR2/4介导NF-κB和MAPKs信号转导途径激活RAW2
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黄秋葵（Abelmoschus esculentus L.）是我们日常生活中的一种常见蔬菜,并且含有大量的多糖。RPS-2是我们先前研究中从黄秋葵中分离出的三种多糖（RPS-1,RPS-2,RPS-3）之一,RPS-2在体内外均具有良好的免疫调节活性。RPS-2对RAW264.7细胞的免疫调节机制尚不清楚,本文旨在研究RPS-2是否通过TLR2/4介导NF-κB和MAPKs信号转导途径激活RAW264.7细胞,从而进一步揭示其免疫调节的可能机制。本研究能为RPS-2的应用提供理论依据,具有一定的学术和应用前景。1通过流式细胞法测定RPS-2对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性。结果表明:在8～200μg/m L浓度范围内,RPS-2显著增强了RAW264.7巨噬细胞的吞噬活性,并呈浓度依赖性,且在RPS-2浓度为200μg/m L时,巨噬细胞的吞噬活性最强。2使用抗TLR2抗体、抗TLR4抗体进行抗体中和反应,探究TLR2/4在RPS-2活化RAW264.7巨噬细胞过程中对NO、IL-10、TNF-α产生的影响。结果显示,抗TLR2抗体和抗TLR4抗体几乎阻断了RPS-2诱导RAW264.7细胞产生NO,IL-10和TNF-α,这说明RPS-2能通过TLR2/4受体激活RAW264.7细胞。3为了探究RPS-2是否能通过TLR2/4介导NF-κB和MAPK信号通路激活巨噬细胞,本试验通过Western blot检测NF-κB和MAPKs信号通路相关蛋白表达及其磷酸化水平。研究结果显示,RPS-2能显著增强NF-κB和IκBα的蛋白磷酸化水平,加入NF-κB信号通路特异性抑制剂PDTC之后,NF-κB和IκBα的磷酸化水平显著降低;RPS-2还显著增强MAPKs信号通路的p38,ERK1/2和JNK的磷酸化蛋白的表达,同时,MAPKs特异性抑制剂（SB203580,PD98059和SP600125）显著抑制了RPS-2诱导的p38,ERK1/2和JNK磷酸化水平。综上说明,RPS-2能通过TLR2/4介导的NF-κB和MAPKs信号通路激活巨噬细胞。4为了进一步验证上述结论,试验检测了NF-κB和MAPKs信号通路的特异性抑制剂对RPS-2诱导巨噬细胞产生NO,IL-10和TNF-α的影响。结果表明,NF-κB通路特异性抑制剂和MAPKs通路特异性抑制剂（SB203580,PD98059和SP600125）显著抑制了RPS-2诱导巨噬细胞中的NO,IL-10和TNF-α的产生。综上所述,黄秋葵多糖RPS-2能通过TLR2/4受体介导NF-κB和MAPKs信号通路激活RAW264.7巨噬细胞。
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