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本研究分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)刺激SPF鸡全血、低速离心所分离的外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)、淋巴细胞分离液所分离的PBMC、低速离心分离的脾脏细胞和淋巴细胞分离液分离的脾脏细胞，[~3H]-脱氧胸苷(~3H-TdR)掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同细胞浓度和不同培养温度下的转化效果，建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性的CpG ODN序列的96孔淋巴细胞转化方法。用此方法筛选自行设计并合成的38条CpGODN。结果表明，CpG ODN 19、21和23具有最佳的免疫刺激活性(刺激指数(SI)＞10)。进而用CpG ODN 19、21和23配合新城疫(ND)灭活疫苗免疫接种7日龄健康AA雏鸡，接种后的第7、17、27、37天分别翅静脉采血测定血清ND病毒的HI效价，接种后的第38天用ND强毒北京株攻击试验鸡。结果显示，含有CpG ODN 19、21和23的ND灭活疫苗组、ND灭活疫苗组和ND油佐剂灭活疫苗组对ND强毒北京株攻击的保护率分别为100％、80％、80％。 根据CpG ODN结构的特点和国内外研究资料，以对人、猪、鼠有良好免疫刺激活性的CpG基序为核心，考虑CpG基序的数目、CpG基序间连接碱基、CpG两端碱基、磷酸骨架的修饰等因素，设计并合成了38条序列。用CpG ODN体外作用于猪PBMC，用~3H-TdR掺入法测定PBMC增殖的程度，用双抗体夹心酶联免疫检测技术(Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay,ELISA)测定CpG ODN作用的PBMC所分泌的IFN-γ。结果表明，具有免疫刺激作用的CpG ODN具有一定的结构特点；筛选出对猪具有最佳免疫刺激活性的CpG ODN 5条(SI＞5.2)。其SI与PBMC所分泌的细胞因子水平不成正比。 为了节约CpG ODN的使用成本，本研究尝试采用基因工程方法，构建了富含免疫刺激活性CpG ODN序列的重组质粒。并利用计算机辅助设计通用的特异性的PCR引物，优化反应条件，分别以重组质粒及其PCR产物为模板，建立了可大量扩增特异的富含不同数目CpG ODN片段的方法。进一步用PCR法扩增富含CpG ODN的这两种片段并纯化，用以刺激PBMC，用~3H-TdR掺入法比较这两种片段对猪PBMC的增殖作用。结果表明，两种富含CpG ODN的片段对猪PBMC均有良好的免疫刺激活性(SI＞4.5)，其作用显著高于含有该片段的重组质粒。