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研究背景近年来,随着国人生活水平的不断提高,痛风在我国的发病率明显升高,且呈年轻化趋势,严重危害患者的身体健康。急性痛风性关节炎常常是自限性的,患者在不通过临床干预的情况下,常常在7-9天可自行缓解。然而,目前对于痛风自发缓解的机制的研究是局限的。其具体的自我缓解机制还不是很清楚。了解其自发缓解的机制有望为治疗复发难治性痛风提供新的治疗策略。痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)是尿酸盐(monosodium urate MSU)从组织液中析出形成晶体沉积于关节及周围组织,进而引起关节急性炎症反应。人体内有识别病原体相关分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs)和危险信号相关分子模式(Danger signals related molecular Patterns,DAMPs)2 种方式,Toll 样受体(Toll-like receptors,TLRs)是人类模式识别受体(PRRS)最主要的一类分子。目前已证实MSU晶体作为一种危险信号,经胞内一系列的信号转导,最终激活IL-1和IL-18,诱导炎症反应。在痛风中,MSU沉积于关节中,表现可以是无症状的或者是急性自限性炎症。MSU与关节腔中的滑膜细胞,巨噬细胞,以及其他细胞相互反应,成为痛风炎症反应的初始靶点,诱导中性粒细胞的浸润。MSU刺激巨噬细胞,释放炎症介质TNF-α,IL-1β,CXCL1,CXCL8(IL-8)。MSU可以被吞噬细胞吞噬,MSU通过TLR2/4及MyD88参与了 TLR2/4介导的NF-kB的活化,同时,TLR2,TLR4介导MSU的吞噬。CD14分子是是GPI锚定蛋白,属细胞表面糖蛋白家族成员之一。它表达多种细胞表面,如单核细胞,巨噬细胞,中性粒细胞等。除了 mCD14,CD14还存在sCD14的形式。CD14分子的生物学效应还不是很清楚。CD14分子是LPS的受体,在单核细胞表面,LPS受体CD14和LPS结合蛋白(LBP)与LPS结合形成一个三分子的复合物,使得单核细胞可以识别LPS的存在。CD14分子充当TLR2和TLR4分子的共受体而增强LPS对于TLR2和TLR4的反应。鉴于,CD14分子对于MSU诱导中性粒细胞引起炎症反应是必须的。是否CD14也参与痛风自发缓解目前仍不清楚,因此探究CD14分子在痛风中自发缓解的机制有望为痛风的治疗寻找新的靶点。研究目的探究CD14分子在痛风中自发缓解的作用及机制。研究方法Elisa检测痛风病人(n=40)与正常人(n=31)上清sCD14,并分析其与CRP的相关性,收集正常人外周血,提取PBMC,MSU及LPS刺激,流式检测CD14分子,以及CD14+cell凋亡情况,同时ELISA检测培养上清中的sCD14。QPCR检测痛风病人PBMC中CD14mRNA.实验结果sCD14在痛风病人中是减低的(p=0.0001),同时,sCD14与CRP呈正相关的关系(p=0.0026,r=0.48),另外,sCD14在CRP<9的患者中较CRP>9的患者中是低的(p=0.0140)。正常人PBMC分别以LPS 0μg/ml,0.1μg/ml,lμg/ml,10μg/ml 刺激16h流式检测CD14占PBMC比例,Mann-Whitney U test统计分析无差异。正常人PBMC以MSU 0μg/ml,30μg/ml,100μg/ml,300μg/ml刺激16h.流式检测CD14占PBMC的比例,Mann-Whitney U test统计分析,刺激浓度为30μg/ml的PBMC与未刺激的PBMC中CD14所占比例无差异。而刺激浓度为100μg/ml PBMC中CD14所占比(p=0.0286)和 300μg/ml PBMC 中 CD14 所占比例(p=0.0286)明显减低。PBMC 以 LPS 0μg/ml,0.1μg/ml,1μg/ml,10μg/ml 刺激 16h,elisa检测上清sCD14统计分析无差异。PBMC MSU0μg/ml,30μg/ml,100μg/ml,300μg/ml刺激elisa检测上sCD14,刺激浓度为30μg/ml,统计分析无差异,100μg/ml(p=0.0296),300μg/ml(p=0.0278)上清中的sCD14明显下降。正常人PBMC分别以LPS Oμg/ml,0.1 μg/ml,1μg/ml,10μg/ml刺激16h流式检测CD14占CD68+比例,Mann-Whitney U test统计分析无差异。正常人PBMC MSU0μg/ml,30μg/ml,100μg/ml,300μg/ml刺激16h.流式检测CD14占CD68+的比例,Mann-Whitney U test统计分析,刺激浓度为30μg/ml的PBMC与未刺激的PBMC中CD14占CD68+细胞比例无差异。而刺激浓度为100μg/ml PBMC中CD14占CD68+细胞比例(p=0.0357)和300μg/mlPBMC中CD14占CD68+比例(p<0.0001)明显减低。正常人PBMC MSU 0μg/ml,30μg/ml,100μg/ml,300μg/ml刺激刺激16h后,胞内染色CD14,并未发现CD14.随着MSU刺激浓度的增加,CD14+凋亡细胞并没有明显变化。另外,sCD14减少并非是与MSU结合导致其减少,然而痛风病人PBMC中CD14mRNA的合成较正常人增高(p=0.0252)。结论我们在痛风病人血清中检测到sCD14是减低的,同时在体外实验中发现正常人PBMC在MSU刺激下单核细胞上CD14是明显减低的,而在LPS刺激下单核细胞上的CD14无明显变化,另外,我们检测到上清中sCD14在LPS刺激下是无变化的,而在MSU刺激下,SCD14是明显降低的。我们推测,PBMC在MSU刺激下CD14以及sCD14的减低,可能参与了痛风的自发缓解机制。另外,我们在胞内染色CD14,并未发现CD14,同时,随着MSU刺激浓度的增加,CD14+凋亡细胞并没有明显变化。但痛风病人PBMC中CD14mRNA的合成较正常人增高。我们推测CD14的减低并非是由于mRNA合成的减低而减低,可能存在其他转录后的调控机制使得CD14分子的减少。