【摘 要】
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栖热菌作为嗜热真细菌中较为古老的类群和研究嗜热菌的模式生物,其噬菌体依其独特的生物学特性及进化地位使其在近期的研究中备受关注。目前发现一共有4个科的噬菌体能感染栖热菌,它们分别是肌尾噬菌体(Myoviridae)、长尾噬菌体(Siphoviridae)、覆盖层噬菌体(Tectiviridae)和丝状噬菌体(Inoviridae)。研究噬菌体及其宿主细胞的相互作用关系一直是生物学领域的研究热点,其中
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栖热菌作为嗜热真细菌中较为古老的类群和研究嗜热菌的模式生物,其噬菌体依其独特的生物学特性及进化地位使其在近期的研究中备受关注。目前发现一共有4个科的噬菌体能感染栖热菌,它们分别是肌尾噬菌体(Myoviridae)、长尾噬菌体(Siphoviridae)、覆盖层噬菌体(Tectiviridae)和丝状噬菌体(Inoviridae)。研究噬菌体及其宿主细胞的相互作用关系一直是生物学领域的研究热点,其中栖热菌属Thermus thermophilus HB27、Thermus thermophilus HB8与其噬菌体P23-45.OYS40在分子调控水平的相互作用关系的研究已经取得了许多新的发现。本研究从云南腾冲热海高温碱性热泉中分离获得一株栖热菌噬菌体TTP23(Thermus Tectiviridae phage23),球状,双链DNA病毒,由外壳蛋白和囊膜组成,直径约60nm,内层囊膜直径约50nm,属于覆盖层噬菌体科。其最适生长温度为65~70℃,最适pH7~7.5,能够引起宿主细胞的裂解,并释放出大量的子代噬菌体颗粒,这是国内首次发现的栖热菌覆盖层噬菌体。通过RNA的提取及反转录、半定量PCR扩增、实时荧光定量PCR、生物信息学及基因组学等手段在分子层面研究了TSP4感染宿主细胞后与宿主细胞的相互作用关系,研究发现TSP4感染宿主细胞后存在早、中、晚三种类型的基因的时序表达,这三种类型的基因由不同的启动子控制,分别为基于5’-TTATTCTTTTa-3’保守序列的早期启动子及基于5’-TATAnt-3保守序列的中期和晚期启动子,两种启动子分别受控于病毒和宿主菌两种不同的RNAP(RNA polymerase)。同时TSP4感染宿主菌后,能够启动相应的蛋白,劫持宿主细胞的RNAP,进而导致宿主细胞的转录受到抑制,宿主细胞的生长、繁殖和代谢速度变缓或抑制。另外TSP4感染宿主菌后,宿主菌能启动基因组上的CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeat)系统,包含CRISPRs、 CRISPR-associated (cas)基因,同时基于cAMP信号分子,传递信号于CRP (cAMP receptor protein), cAMP-2CRP复合物能够结合在某些依赖CRP蛋白基因上游的一段保守序列上,大量聚集RNAP,启动相关(22种)响应蛋白的转录与表达,分别以两种不同的方式启动宿主细胞的防御体系(响应体系),以此来阻止病毒或外来复制子对宿主细胞的攻击。本研究有助于进一步丰富我国高温噬菌体资源,了解腾冲热海高温噬菌体资源的分布及特征,并从基因水平了解噬菌体的基因转录策略及其与宿主细胞长期的相互适应、相互作用关系,对阐明嗜热菌的进化及其耐热机制也有帮助。
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