论文部分内容阅读
目的:本次实验通过土贝母皂苷乙对人肺癌A549细胞株的抑制作用，初步探讨土贝母皂苷乙对其抑制作用的机理，为进一步研究该化合物抗肿瘤的分子机制、作用靶点及临床研究奠定基础。 方法: (1)在细胞培养箱中培养A549细胞，用倒置显微镜观察A549细胞的形态，台盼蓝染色观察其活力。 (2)MTT法检测不同浓度的土贝母皂苷乙处理A549细胞24h及48h的生长抑制作用，确定24h和48h半数抑制的药物浓度。以土贝母皂苷乙作用于宫颈癌细胞（Hela细胞）为对照。 (3)用Hoechst33342和碘化丙啶染料对土贝母皂苷乙处理后的细胞进行染色，荧光显微镜观察细胞的形态。 (4)用DNA琼脂糖凝胶电泳方法分析该药物处理A549细胞后的DNA电泳条带。 (5)用流式细胞仪检测土贝母皂苷乙对细胞凋亡率的影响。 结果: MTT结果表明，土贝母皂苷乙对A549细胞及Hela细胞都有细胞毒性，都能抑制细胞的增殖，但是同等浓度的土贝母皂苷乙作用于A549细胞比作用于Hela细胞的抑制作用更强，土贝母皂苷乙诱导A549细胞凋亡的能力比后者强。土贝母皂苷乙作用A549细胞24小时的IC50为13.37μg／ml，48小时的IC50为10.99μg／ml，与对照组比较存在显著性差异，有统计学意义。说明土贝母皂苷乙对A549细胞的生长有抑制作用，并且呈时间和剂量依赖性。荧光显微镜观察到对照组细胞的细胞核比较完整，分布均匀，经土贝母皂苷乙处理的细胞核皱缩、染色体聚集，核破裂形成小体，凋亡现象较明显，初步可判断这一典型的调亡特征是通过土贝母皂苷乙诱导产生的。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示：对照组中细胞的DNA完整，低浓度的土贝母皂苷乙处理细胞，DNA无明显的断裂，而高浓度处理后DNA明显断裂，在200bp～700bp之间，呈梯型电泳条带，更进一步证实了土贝母皂苷乙能使A549细胞的DNA片段化，也就是说能诱导其凋亡。FCM分析结果显示用浓度为5μg／ml、10μg／ml、20μg／ml、40μg／ml、60μg／ml的土贝母皂苷乙处理A549细胞24小时后，随浓度的升高，凋亡率依次升高，早期的凋亡率分别为3.57%，11.16%，15.48%，20.87%，23.59%，坏死率分别为2.88%，10.31%，11.44%，12.45%，13.28%，可以看出低浓度时早期凋亡率与坏死率差别不明显，当浓度增大时早期凋亡率明显高于坏死率，说明土贝母皂苷乙可以诱导A549细胞早期凋亡，且与浓度有一定的依赖关系。 结论:土贝母皂苷乙对人肺腺癌A549细胞有抑制作用，其24小时IC50为13.37μg／ml，在一定浓度下呈剂量及时间依赖性。土贝母皂苷乙能诱导人肺腺癌A549细胞早期凋亡，且与浓度有一定的依赖关系。