放射治疗(RT)已被推荐用于治疗不可切除的局部晚期肝细胞癌(HCC)，放射性肝病(RILD)是阻碍肝癌放疗疗效提高的主要并发症。多数HCC患者伴有乙型肝炎病毒(HBV)感染等所有能继发肝纤维化的基础疾病，而这些基础疾病也与RILD密切相关。Toll样受体4(TLR4)不仅在HBV感染及相关肝损伤中起重要的免疫作用;而且，理论上，也可被放疗相关组织破坏产生的内源性损伤信号分子所激活，释放致炎因子，促进放射性损伤。另外，肝脏组织间隙液(TIF)，作为一特殊的微环境，在肝损伤过程中起着细胞间信息通讯的作用。改变微环境可影响肝细胞的放射敏感性。为此，本研究主要探讨TLR4、HBV活化是否改变肝TIF，进而影响RILD，寻找早期诊治RILD的新靶点，本文从以下几个方面进行论述。　　第一部分 基于螺旋断层立体定向放疗，建立小鼠放射性肝病模型及相关正常组织剂量限量　　目的:螺旋断层立体定向放射治疗(HT-SBRT)构建小鼠放射性肝病(RILD)模型，探索HT-SBRT诱导显著小鼠RILD的确切剂量和危及器官的剂量限量。　　方法:30只小鼠按肝脏及危及器官阶梯放疗剂量随机分组，使用螺旋断层放疗仪(TOMO)对小鼠肝脏等行HT-SBRT治疗。观察小鼠体力状况评分(MPS)、体重减轻、柏油样血便等情况，检验血清中谷草转氨酶(AST)/谷丙转氨酶(ALT)/白蛋白水平，检测小鼠肝脏及危及器官的病理改变。建立肝脏和相关危及器官放射性损伤的病理评价标准，并对小鼠各器官放射损伤的严重程度进行评分。　　结果:小鼠全肝接受放疗剂量≥31.76±1.94 Gy的HT-SBRT治疗，可诱发显著放射性肝病，建立小鼠RILD模型。同时，确立相关危及器官的放疗剂量限量，例如:肺，V20≤20.3％;肾脏，V10≤11.3％;肝脏:平均剂量＜26.36±1.71 Gy;胃肠道，最大剂量≤22.63 Gy等。另外，初步定义小鼠腹部HT-SBRT相关副反应评价标准: MPS≥1.5±0.56，体重下降≥0±0.89g， AST/ALT≥589.2±118.5/137.4±15.3 U/L，血清白蛋白≤18.8±0.99g/L。　　结论:基于小鼠腹部放疗相关危及器官剂量限量及副作用评价标准的确立，利用HT-SBRT可以成功建立小鼠RILD模型，这有利于今后在HT-SBRT治疗肝细胞癌等腹腔肿瘤等方面的深入研究。　　第二部分 TLR4免疫，而非HBV活化，促进小鼠放射性肝病　　目的:Toll样受体4(TLR4)可触发乙型肝炎病毒(HBV)感染及肝损伤中的关键免疫反应。HBV活化或TLR4免疫则可能是防治肝癌放疗并发症——放射性肝病(RILD)的重要靶点。　　方法:本研究分为两阶段。第一阶段，运用高压水注射法以含完整HBVDNA的pAA V/HBV质粒感染TLR4缺陷(TLR4-)小鼠后，对感染或不感染HBV的TLR4-小鼠行全肝30 Gy放疗;同时，设立对照组不行全肝放疗。第二阶段，对TLR4正常(TLR4+)小鼠行全肝放疗，比较其与TLR4-小鼠放疗后RILD的差异;研究小鼠全肝放疗后HBV活化、TLR4免疫和RILD严重程度之间的相关性。　　结果:放疗可以促进HBV活化;但无论有、无HBV放疗后活化，TLR4-小鼠全肝放疗不出现显著RILD。然而，TLR4+小鼠全肝放疗可诱导显著RILD，TLR4+小鼠的RILD评分（2±0.27）高于TLR4-小鼠（0.5±0.19），P＜0.05。　　结论:放疗可以促进HBV活化;但RILD的严重程度与小鼠TLR4免疫相关，与HBV活化无关。　　第三部分 TLR4免疫改变小鼠肝组织间隙液(微环境），促进放射性肝病　　目的:探讨Toll样受体4(TLR4)免疫和肝组织间隙液(TIF)在防治肝脏放疗继发放射性肝病(RILD)中的作用机制。　　方法:本研究包括两阶段。初步研究阶段，予以TLR4缺陷(TLR4-)和TLR4正常(TLR4+)小鼠全肝30 Gy放疗。20天后提取肝脏TIF，并使用小鼠蛋白抗体芯片检测，分析肝TIF内蛋白变化与TLR4免疫、RILD严重程度之间的关系。验证阶段，原代分离培养TLR4+及TLR4-小鼠肝细胞，6MV-X线照射后8 Gy后，分别与第一阶段提取的TIF共培养。流式细胞仪进行肝细胞凋亡相关检测。　　结果:伴随肝TIF内GM-CSF、TRAIL和VEGFR-2的高表达，TLR4+小鼠较TLR4-小鼠更易出现显著RILD，P＜0.05。TLR4+和TLR4-小鼠肝细胞放疗后与TLR4+小鼠全肝放疗后提取的肝TIF共培养，两者的凋亡率均显著高于与TLR4-小鼠全肝放疗后的TIF及未放疗小鼠的TIF共培养的肝细胞，P＜0.05。　　结论:TLR4免疫提高TIF（即肝脏微环境）中GM-CSF、VEGFR-2和TRAIL的表达，促进RILD。　　第四部分 临床分析放疗后手术肝癌患者H-BV、TLR4及相关蛋白对放射性肝病的影响　　目的:临床研究HBV活化、TLR4免疫、TLR4相关蛋白在人类放射性肝病(RILD)中的作用和机制，进一步验证在小鼠研究中获得相关结论，促进基础实验研究成果到临床应用的快速转换。　　方法:回顾分析放疗后行手术切除肝癌的我院28例患者的病史及病理资料。石蜡包埋保存的手术病理标本中，放疗剂量为35-48 Gy的癌周肝组织被用于构建组织芯片，行免疫组化染色和HE染色检查;研究人类肝脏放疗时，HBV活化、TLR4免疫、TLR4相关蛋白和RILD严重程度之间的关系。　　结果:相对于肝脏HBsAg高表达或TLR4低表达病例，肝TLR4高表达者易于出现显著RILD病理改变。在肝脏放疗后HBV活化的12例病人中，TLR4高表达的病例仅占2例;而在9例无放疗后HBV活化的病人中，却有6例病人肝脏TLR4高表达(P＜0.03）。此外，相对于肝脏TLR4低表达，TLR4高表达病例肝脏内TRAIL、VEGFR-2和GM-CSF的表达水平显著升高，促进RILD(P＜0.05)。　　结论:在临床上，也是TLR4免疫，而非HBV活化，显著影响RILD。肝癌放疗中，肝脏TLR4高表达不仅可以抑制HBV活化，而且可以促进肝内TRAIL、VEGFR-2和GM-CSF的表达，进而诱导严重RILD。