论文部分内容阅读
再生障碍性贫血(简称再障,Aplastic Anemia, AA)是由多种因素(包括物理、化学、生物、药物及其他尚不完全明确的因素)造成骨髓造血衰竭的血液系统疾病,既往认为主要病理机制为骨髓造血干细胞数量和质量的异常及骨髓造血微环境的破坏,临床表现为全血细胞的减少。该疾病治疗疗程长,治疗效果差,病死率高,严重危害患者身心健康。然而直至目前,再障的发病机制仍不完全明了。既往研究认为AA的发病机制与免疫细胞及其活化信号异常密切相关。而最近国内外相关研究提示遗传易感性特别是某些基因水平的异常改变在AA发病机制中发挥着不容忽视的作用。其中端粒酶活性及相关基因表达的异常在再障发病机制中的意义,越来越引起血液学研究者们的关注和兴趣。端粒是真核细胞中染色体末端的特殊结构,能保护染色体在细胞分裂过程中,保持自身结构和功能的完整性,避免染色体发生端端融合、重组和丢失。但端粒自身存在与年龄相关的长度缩短,此时需要一种特殊的酶-—端粒酶来补偿这种丢失而维持端粒长度。端粒酶由端粒酶RNA组分(TERC)与端粒酶逆转录酶(TRET)构成,它能够以自身携带的RNA为模板在染色体末端添加端粒重复序列,在维持端粒长度和稳定性方面发挥重要作用。当端粒缩短至一定范围时,端粒酶活性表达的有无具有至关重要的作用。有研究表明再生障碍性贫血患者外周血粒细胞端粒长度缩短,且缩短程度与患者疾病持续时间存在相关性[1]。儿童骨髓造血干细胞增殖潜能较成人高,端粒相对缩短不明显,那么再障患儿骨髓造血干细胞端粒酶活性水平表达如何,是否随端粒长度改变而变化,上述两个端粒酶基因的表达在再障发病过程如何变化,目前尚未见相关研究报道。因此为明确以上疑问,我们进行了以下研究。目的探讨AA患儿骨髓造血干细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERT)基因和端粒酶RNA组分(hTERC)基因的表达变化和关系,为再障诊治及其判断预后寻找新的参考指标。材料与方法收集2011年6月-2012年6月郑州大学第三附属医院及第一附属医院经临床和实验室初次确诊的再障患儿65例为病例组,其中慢性再障(CAA)52例,急性再障(SAA)13例,同时收集郑州大学第三附属医院就诊并严格排除血液系统疾病及其他重大恶性肿瘤患儿21例作为对照组。3组患儿既往均未给予输血及免疫抑制治疗,且年龄、性别差异无统计学意义。用重复序列扩增(TRAP)-PCR银染法检测3组患儿骨髓造血干细胞端粒酶活性,用实时荧光定量RT-PCR法分别检测hTERT mRNA和hTERC mRNA的表达水平。结果采用SPSS17.0统计软件进行分析,定量资料采用均数±标准差(X±S)表示,多组间比较以单因素方差分析进行,组间比较采用LSD法,关联分析则采用线性相关分析,P≤0.05为差异有统计学意义,以a=0.05为检验水准。结果1.端粒酶活性表达水平：CAA组为41.35±10.28、SAA组端粒酶活性31.86±8.54明显高于对照组23.50±9.13(P<0.01),且CAA组平均端粒酶活性较SAA组升高(P<0.05)；2. hTERT mRNA的表达水平：CAA组为9.86±1.10,SAA组为5.12±0.89,均高于对照组(1.17±0.73),差异有统计学意义(P<0.05),且CAA组高于SAA组,差异有统计学意义(P<0.01)；3. hTERC mRNA表达水平：CAA组为1.23±0.50,SAA组为1.13±0.45,对照组为1.18±0.64,三组间差异无统计学意义(P=0.812)；4.端粒酶活性、hTERT mRNA及hTERC mRNA表达相关性：端粒酶活性高低与hTERT mRNA表达呈正相关(r=0.660,P<0.01), hTERCmRNA的表达与端粒酶活性无明显相关性(P=0.193), hTERT mRNA与hTERCmRNA表达无相关性(P=0.746)。结论1.再障患儿骨髓造血干细胞端粒酶活性和hTERT mRNA表达水平升高,且慢性再障儿童两者表达均高于急性再障患儿,hTERT是端粒酶活性表达的控制因素。2.端粒酶活性的表达变化与儿童再障发病及发展过程有关,hTERT表达在端粒酶活性调节过程中起重要作用。