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目的：研究转染C型利钠利尿肽（CNP）基因的骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合壳聚糖/丝素支架材料对大鼠关节软骨缺损的修复效果，进一步探索软骨缺损的修复方法。 方法：1、采用全骨髓培养法分离SD大鼠BMSCs并进行传代培养、鉴定及多向分化能力测定。2、将已构建的含有人CNP基因和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺病毒(Ad-NPPC-eGFP)按照特定转染复数(MOI)转染BMSCs，通过流式细胞仪(FCM)检测转染效率，Real-time PCR检测转染后CNP mRNA的表达情况，MTT实验检测转染后对细胞增殖的影响，阿尔新蓝染色检测转染后BMSCs体外诱导21d时成软骨情况，并进一步通过Real-time PCR检测此时成软骨相关基因collagenⅡ、Aggrecan及Sox9的表达情况。3、以蚕丝及壳聚糖为原料，分别制得2％丝素蛋白以及2％壳聚糖溶液，将其按50/50共混比混合，经冷冻干燥技术得到壳聚糖/丝素支架材料。通过大体观察、扫描电镜(SEM)观察支架材料的特征及孔隙大小，体积法计算支架材料的孔隙率，并通过荧光显微镜观察转染Ad-NPPC-eGFP的BMSCs在支架材料中的增殖情况。4、将48只SD大鼠随机分为四组：对照组(C)、单纯支架组(S)、MSC/支架组(MS)、转染CNP的MSC/支架组(CMS)，分别建立直径1mm，深1mm的关节软骨缺损进行软骨缺损的修复实验，C组不做任何处理，S组为在缺损部位植入壳聚糖/丝素支架材料，MS组植入复合有BMSCs的壳聚糖/丝素支架材料，CMS组植入复合转染CNP基因的BMSCs及壳聚糖/丝素支架材料，分别在4w、8w、12w处死动物进行软骨修复情况大体观察及HE染色和甲苯胺蓝染色观察，进行组织学评分。 结果：1、成功获取了大鼠BMSCs，其形态主要表现为梭形、椭圆形及多角形，呈放射状、涡旋状生长，流式细胞仪检测结果显示其高表达间充质干细胞表面标志，不表达造血干细胞表面标志，成脂、成骨分化诱导结果表明其具有较好的多向分化能力。2、腺病毒转染后细胞状态良好，转染效率较高，与对照组相比，虽然增殖略有下降，但差别无统计学意义(P＞0.05)。转染后BMSCs CNP mRNA高水平表达(P＜0.05)，成软骨诱导21d时的阿尔新蓝染色结果表明转染重组腺病毒Ad-NPPC-eGFP的BMSCs体外成软骨能力好于单纯诱导组及转染Ad-eGFP诱导组(P＜0.05);且诱导21d时转染Ad-NPPC-eGFP诱导组成软骨相关基因collagenⅡ、Aggrecan及Sox9的mRNA表达量明显高于单纯诱导组以及转染Ad-eGFP诱导组(P＜0.05)。3、壳聚糖/丝素支架材料呈乳白色，为多孔海绵状结构，表面粗糙，材料上部孔隙相对较大，而底部孔隙较小。材料内部可见互相交通的不规则网孔。材料的孔隙率在83％-90％之间，通过SEM观察可见材料的上部孔隙大小在150-200μm之间，底部的孔隙大小在10-20μm之间，孔隙大小合适，荧光显微镜显示细胞在植入支架材料72h后较12h时出现了明显的增殖。4、成功构建了大鼠关节软骨缺损的动物模型，通过大体观察、组织学染色观察、组织学评分等证明CMS组较C组、S组及MS组具有更好的软骨缺损修复效果(P＜0.05)。 结论：应用转CNP基因BMSCs复合壳聚糖/丝素支架材料修复大鼠关节软骨缺损具有较好的修复效果，进一步丰富了关节软骨缺损的修复方法。